一种哺乳动物细胞rep表达质粒p5RCM1及其制备方法和应用

摘要

本发明属生物技术和基因治疗技术领域，具体为一种用于哺乳动物细胞内反式提供rep蛋白的表达质粒。该表达质粒具有负反馈调节机制，即在rep达到一定水平后反馈关闭rep蛋白的表达，并且该质粒有自身不整合到宿主基因组的特性。该质粒的特性源于对AAV病毒P5启动子的RBE的定向突变，使其在细胞内可以如野生P5启动子一样具有负反馈作用，但是不像野生P5一样具有整合到基因组的能力，一方面保证rep适度表达，避免rep短期细胞毒性，同时防止自身整合到基因组，提高长期遗传安全性。该质粒可以广泛用于需要适度反式提供rep蛋白的基因操作和基因治疗体系，如AAV病毒包装体系和依赖RBE介导的基因定点整合操作与基因治疗。

主权项

1.一种顺式元件P5M273，其特征在于由下述方法制备获得：将DNA序列为SEQ.NO1的野生P5中的RBE通过定向突变，使其保留rep负反馈作用，但是失去自身整合到宿主AAVS1位点的能力，其DNA序列为SEQ.NO2。