用于测量DNA聚合作用的方法及其应用

摘要

描述了一种用于测量生物样品中依赖DNA的DNA聚合作用的方法。所述方法包括下述步骤：提供一种与固相结合的引物，所述引物具有单链特异性短序列且不能进行内部碱基配对；使所述引物构建体与含有其序列的一部分与所述引物互补的单链脱氧核苷酸模板和四种脱氧核苷三磷酸的反应混合物接触，其中一种脱氧核苷三磷酸经修饰致使其为标记抗体所特异性识别；向所述混合物中加入包含所述DNA聚合酶例如逆转录病毒逆转录酶(RT)的生物样品；让所述聚合酶反应进行；将所述固定化反应产物与所述标记抗体一起温育；检测结合标记抗体的量；并且测量掺入的修饰脱氧核苷三磷酸的量，作为所述DNA聚合作用的测量结果，可将其用于药物敏感性测试。也公开了一种商业成套试剂。

主权项

1.一种用于测量生物样品中依赖DNA的DNA聚合作用的方法，所述方法包括下述步骤：a)提供一种与固相结合的引物，所述引物具有单链特异性短序列且不能进行内部碱基配对，b)使所述引物构建体与含有单链脱氧核苷酸模板构建体和四种脱氧核苷三磷酸的反应混合物接触，其中一种脱氧核苷三磷酸经修饰致使其为标记抗体所特异性识别，其中单链脱氧核苷酸模板构建体从5’端起由重复的腺嘌呤序列、可变部分和与所述引物互补的序列组成，所述可变部分含有胞嘧啶-胸腺嘧啶-鸟嘌呤重复序列或胞嘧啶-胸腺嘧啶-鸟嘌呤-腺嘌呤重复序列，c)向b)的混合物中加入包含所述DNA聚合酶的生物样品，d)让所述聚合酶反应进行，e)将由d)产生的固定化反应产物与所述标记抗体一起温育，f)借助所用的标记检测结合的标记抗体的量，和g)借助所述结合抗体的标记测量掺入的修饰脱氧核苷三磷酸的量，作为所述DNA聚合作用的测量结果。