发明名称 一种异源表达和纯化人艾滋病病毒辅助受体CCR5的方法
摘要 本发明公开了一种异源表达和纯化人艾滋病病毒辅助受体CCR5的方法,该方法主要包括步骤:构建诱导型GST-CCR5融合蛋白表达载体并转化粟酒酵母;鉴定粟酒酵母转化子;GST-CCR5融合蛋白在粟酒酵母中的诱导表达;确认CCR5基因在粟酒酵母中得到表达;分离和纯化GST-CCR5融合蛋白;检测分离纯化的GST-CCR5融合蛋白;鉴定分离纯化的GST-CCR5融合蛋白;从GST-CCR5融合蛋白中的分离和纯化人类CCR5蛋白。本发明的方法可以应用于在粟酒酵母中表达高等动植物的膜蛋白,并且获得的蛋白质具有翻译后的修饰作用和生物活性。表达的膜蛋白对于研究其晶体结构和高通量药物筛选有应用价值。
申请公布号 CN101148662A 申请公布日期 2008.03.26
申请号 CN200710092672.X 申请日期 2007.09.06
申请人 重庆大学 发明人 胡宗利;陈绪清;陈国平;潘宇;杨妤欣;胡廷章
分类号 C12N15/09(2006.01);C12N15/62(2006.01);C12N1/19(2006.01);C12P21/02(2006.01);C07K19/00(2006.01) 主分类号 C12N15/09(2006.01)
代理机构 重庆志合专利事务所 代理人 胡荣珲
主权项 1.一种异源表达和纯化人艾滋病病毒辅助受体CCR5的方法,其特征在于该方法包括以下步骤:(1)构建诱导型GST-CCR5融合蛋白表达载体;(2)将GST-CCR5融合蛋白表达载体转化粟酒酵母,筛选和鉴定粟酒酵母转化子;(3)GST-CCR5融合蛋白在粟酒酵母中的诱导表达;(4)确证CCR5基因在粟酒酵母中得到表达;(5)分离和纯化GST-CCR5融合蛋白;(6)检测分离纯化的GST-CCR5融合蛋白;(7)鉴定分离纯化的GST-CCR5融合蛋白;(8)人类CCR5蛋白从GST-CCR5融合蛋白中的分离和纯化。
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