一种同时受外源IPTG和O<SUB>2</SUB>浓度调控的表达载体及其构建方法

摘要

本发明公开了一种同时受外源IPTG和O₂浓度调控的表达载体及其构建方法，利用乳糖操纵子调节基因LacIq和操纵基因Lac0，与类球红细菌puc操纵子的启动子构建成一个同时受外源IPTG和O₂调控的强杂合启动子，同时在结构基因pucB后插入Xa因子、限制性内切酶位点和10个组氨酸编码序列，便于接入外源基因构建成pucB融合蛋白，该表达载体可以在类球红细菌LH2缺失突变株中大量诱导表达，并可经组氨酸亲和层析法分离纯化外源蛋白。该发明可用于利用类球红细菌研究光合细菌中各种光合系统基因的表达以及在类球红细菌表达系统中人为调控外源蛋白的表达和纯化提供了有效的工具。

主权项

1.一种同时受外源IPTG和O2浓度调控的表达载体的构建方法，其特征在于该方法包括步骤：(1)大肠杆菌乳糖操纵子调节基因LacIq的PCR扩增并连接到表达载体pRK415上；(2)类球红细菌puc操纵子的启动子和大肠杆菌乳糖操纵子的操纵基因Lac0的PCR扩增及与步骤(1)中所得的连接产物连接；(3)类球红细菌puc操纵子的SD序列，结构基因pucB和Xa因子的PCR扩增及与步骤(2)中所得的连接产物连接；(4)10个组氨酸编码序列和类球红细菌操纵子的结构基因pucA，pucC及终止子的PCR扩增及与步骤(3)中所得的连接产物连接。