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1.一种植物根内生防细菌的高效筛选方法，其特征在于采用改进的TY培养基，稀释平板法分离细菌，在另一Ch+TY平板上均匀地涂上病原真菌悬浮液，然后接种菌落形状、大小和颜色不同的10个细菌菌落进行培养，观察真菌周围是否有抑菌带出现，有抑菌带出现的即为目标细菌；其方法及具体步骤如下：a.细菌分离取约0.1g植物干根，至于表面用酒精消毒的研钵中，加入MgSO4缓冲液，将根样研磨成匀浆，准备三支试管分别装入0.9ml MgSO4缓冲液并配制成10-2、10-3、10-4的稀释液和三个TY平板，培养皿背面标好日期和稀释度10-2、10-3、10-4，分别从三支试管中取稀释液置于一TY平板上，依次作三个平板，将三角玻璃棒浸入酒精中稍许，于酒精灯上燃烧，重复两次，用酒精消毒的三角玻璃棒涂匀TY平板，先涂10-4，再涂10-3，最后涂10-2，该过程三角玻璃棒不用反复消毒，将所有的平板于28℃细菌培养箱中培养；b.生防细菌初筛配制病原真菌悬浮液，取病原真菌悬浮液均匀地涂在Ch+TY平板上，用已灭菌的接菌棒挑出每个培养皿形状、大小和颜色不同的10个细菌菌落，接种于已涂真菌孢子悬浮液的Ch+TY平板上，但个别生长特快的细菌只能一个Ch+TY平板上接种一个细菌菌落，于25℃真菌培养箱中培养，培养2-3天，发现有的细菌周围出现抑菌带(不长真菌)或菌丝长得较短、产生较少孢子或没有孢子产生，即为目标细菌；c.纯化用已灭过菌的接菌棒挑出目标细菌，于另一Ch+TY平板上划线纯化，并且划8-10条线，换另一个无菌棒，以上一条线为起点继续划线，于28℃细菌培养箱中培养，一天即可观察，如果发现仍有形状、大小和颜色不同的细菌菌落，则需分别挑取继续纯化，直至每皿呈现形状、大小和颜色均相同的菌落；d.复筛将已纯化的细菌与病原真菌于Ch+TY平板上划平行线对峙培养，或于Ch+TY平板中心点接入病原真菌，真菌周围约等距离四点接入细菌，于25℃真菌培养箱中培养，2-3天可测定抑菌带宽，计算抑菌率；e.生防菌保存将生防细菌接入直径为4cm的Ch+TY培养皿中心，或试管斜面划蛇形线，28℃培养一天后，用封口膜封好，4℃保存，备用。 |
