一种基于磁性纳米粒子聚合酶链式反应(PCR)的单核苷酸多态性(SNP)高通量分型方法

摘要

本发明公开了一种利用磁性纳米粒子聚合酶链式反应的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)分型的新方法。其特征在于将单侧引物固定到磁性纳米颗粒上，直接在磁性纳米粒子表面扩增靶序列，然后通过磁性纳米颗粒－ssDNA复合物与等位基因特异探针杂交的方法，实现对样品的分型。此方法无需产物纯化、浓缩，扫描分型快速、直观，是一种操作简单、快速、高通量、高灵敏度的分型方法。

主权项

1.一种基于磁性纳米粒子PCR的单核苷酸多态性分型方法，包括下述步骤：(a)选取待检测功能SNP位点。设计一对扩增引物(其中一条5’端经过标记)和两条带有标记物的野生和突变检测探针。(b)将一端标记的引物固定在标记物修饰的磁性纳米粒子上，在含有自由引物、dNTP、聚合酶和模板DNA的体系中进行PCR反应，直接在磁性纳米粒子表面扩增出包含有待测SNP位点的靶序列，构成磁性纳米粒子-DNA复合物。(c)磁性纳米粒子-DNA复合物变性后，与两条等位基因特异性探针杂交。通过控制杂交温度，使野生纯合型样本只与野生探针匹配，突变纯合型样本只与突变探针匹配，杂合型样本与两种探针均匹配。(d)将杂交有检测探针的磁性纳米粒子经洗涤、变性、磁分离后，通过检测变性下来探针上的标记物来实现对样本的SNP分型。