发明名称 |
一种重组可溶性人FGFR2胞外段及其生产方法与应用 |
摘要 |
本发明公开了一种重组可溶性人FGFR2胞外段及其生产方法与应用。本发明在通过大肠杆菌高效表达FGFR2的基础上,对影响其复性效率的各种因素进行了定性定量研究,确定了重组人可溶性人FGF受体胞外段体外变复性的较为合适的方法,使其复性效率达到10%~20%,且成本低、周期短、适合大规模生产。本发明利用游离的FGFRs的胞外段与血液及肿瘤组织中的FGFs结合,降低了游离FGFs的水平,从而竞争性抑制了FGFs的信号,有效抑制了肿瘤的增殖、转移以及血管形成,并以S252W+P253R双突变型FGFR2胞外段的效果最佳。 |
申请公布号 |
CN101139387A |
申请公布日期 |
2008.03.12 |
申请号 |
CN200710029286.6 |
申请日期 |
2007.07.20 |
申请人 |
暨南大学 |
发明人 |
洪岸;汪炬;张志成 |
分类号 |
C07K14/47(2006.01);C12N15/12(2006.01);C12N1/21(2006.01);A61K36/17(2006.01);A61P35/00(2006.01) |
主分类号 |
C07K14/47(2006.01) |
代理机构 |
广州粤高专利代理有限公司 |
代理人 |
陈卫 |
主权项 |
1.一种重组可溶性人FGFR2胞外段的生产方法,其特征在于包括如下步骤:(1)目的基因截短型FGFR2的构建;根据截短型FGFR2胞外段氨基酸序列,按照大肠杆菌密码子偏好性原则设计四对引物,四对引物序列分别如序列表NO:1~NO:4所示,由内而外分别进行四轮重叠延伸扩增,首先是F1、R1互为模版扩增,然后以第一轮产物作为模版,F1、R1作为引物进行下一轮的扩增,如此进行4轮扩增;(2)FGFR2双突变型的构建;针对S252W和P253R双突变的引物称为M252+253_F和M252+253_R,序列如序列表NO:5所示;(3)双酶切FGFR2基因与载体,连接构建重组载体,转化宿主菌,构建FGFR2基因工程菌;(4)培养FGFR2基因工程菌,分离、清洗、溶解包涵体得到包涵体溶解液;(5)纯化包涵体;(6)复性;(7)超滤、冻干得到可溶性人FGFR2胞外段。 |
地址 |
510630广东省广州市天河区石牌 |