一种17β－雌二醇分子印迹聚合物的制备方法及应用

摘要

一种17β－雌二醇分子印迹聚合物的制备方法及应用，属于生物样品及食品样品中的17β－雌二醇分析测定技术领域。本发明提出一种制备17β－雌二醇分子印迹聚合物的方法以及利用分子印迹法对生物样品及食品样品中17β－雌二醇进行分离纯化及检测的方法。本发明合成得到的17β－雌二醇分子印迹聚合物具有选择性吸附特征，可以对环境、生物样品及食品样品中的17β－雌二醇分子进行分离提纯、浓缩和快速测定分析。

主权项

1.一种17β-雌二醇分子印迹聚合物的制备方法，其特征是包括如下步骤：(1)反应物配料处理：将一种或两种聚合物功能单体、部分致孔剂分别与模板分子17β-雌二醇标准品混合，超声波处理3～5min混合均匀，冲入氮气密封3min，静置处理3小时；所述聚合物功能单体选自：丙烯酸类：丙烯酸、甲基丙烯酸、甲基丙烯酸甲酯、三氟甲基丙烯酸，酰胺类：丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺，吡啶类：2-乙烯基吡啶或4-乙烯基吡啶；所述致孔剂选自乙腈、氯仿、二氯甲烷或四氯化碳；(2)聚合反应：将上述混合物加入交联剂、剩余致孔剂、引发剂，混合均匀后冲氮气密封3min；在容器中采用热引发或光引发方式进行沉淀聚合，合成分子印迹聚合物；所述交联剂选自：三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、乙二醇二甲基丙烯酸酯、二乙烯基苯季戊四醇三丙烯酸酯或季戊四醇四丙烯酸酯；采用的引发剂为偶氮二异丁腈；热引发反应条件为：聚合温度控制在43℃～90℃，反应16～48小时；或光引发反应条件为：用30W～250W紫外灯在48小时之内聚合得到的产物，聚合温度控制在0℃～8℃；在步骤(1)和(2)中，模板分子17β-雌二醇与聚合物功能单体的摩尔比例为0.1～1∶1；交联剂与聚合物功能单体的摩尔比例为0.5～5∶1；致孔剂总体积用量与交联剂摩尔数比例mL/mmol为15～30∶1；引发剂与聚合物功能单体的摩尔比例为0.08～0.12∶1(3)去除模板分子，纯化分子印迹聚合物：将(2)中聚合反应合成的分子印迹聚合物从反应容器中取出，用单一或混合的有机溶剂初步萃取模板分子，继续添加丙酮，静置沉淀，去除悬浮的精细颗粒和模板分子，反复几次沉淀直至悬浮液中不再检测出17β-雌二醇，再用丙酮或甲醇混合，经真空干燥得到纯净的分子印迹聚合物；(4)检测：色谱柱洗脱，检测分子印迹聚合物：将干燥的聚合物颗粒填装到空的色谱柱中，用甲醇和乙酸的混合试剂作为洗脱流动相，经液相泵进行联机洗脱，洗脱效果经检测器检测，当洗脱至基线平直为止，说明已将模板分子去除；液相检测：Waters model 510高效液相泵填实，检测器为waters 490EProgrammable Multiwavelenghth Detector，分别以色谱纯甲醇、乙腈为流动相，以0.5mL·min-1流速洗脱至基线稳定为止，进样10μL，检测波长设置：对17α-雌二醇和17β-雌二醇均为281nm，对孕酮和雄烯二酮为235nm，以10μL丙酮乙腈溶液10μL·mL-1测定死时间，色谱工作站为ANASTAR ChromatographyData System，考察指标为：容量因子K′＝(t-t0)/t0，t是所测甾醇的保留时间，t0 是死时间；分离因子α＝K′(17β-E)/K′compound；印迹因子IF＝K′imp/K′blank；选择性因子S＝IF(17β-E)/IF compound。