发明名称 |
一种重组人复合α干扰素的制备方法 |
摘要 |
本发明涉及一种经真核表达制备重组人复合α干扰素(cIFN)制备方法,其主要步骤是:将酵母工程菌(PichiapastorisGS115/pPIC9K-CIFN)经种子培养、发酵罐培养、外源蛋白诱导表达及目标蛋白纯化后获得cIFN,其特征在于,在外源蛋白诱导表达启动时加入Tween-20、Tween-80、SDS、TritonX-100、TritonX-114、NP-40、CHAPS、Zwittergent3-14、LiDS、胆酸钠、脱氧胆酸钠、辛匍糖苷或/和Brij35,加入量为0.01~10g/L发酵液;外源蛋白诱导表达的温度控制在20~30℃;外源蛋白诱导表达时发酵液的pH值控制在3.0~7.0且发酵液中的甲醇含量控制在1.0~10.0g/L发酵液。本发明不仅实现了cIFN的高密度高发酵表达,而且使cIFN在发酵液中维持了正确的单体分子状态和生物活性,大大抑制了cIFN聚合体和降解产物的形成。 |
申请公布号 |
CN100372933C |
申请公布日期 |
2008.03.05 |
申请号 |
CN200510028285.0 |
申请日期 |
2005.07.29 |
申请人 |
华东理工大学 |
发明人 |
储炬;郝玉有;张嗣良;庄英萍;史琪琪;王永红;杭海峰;刘志敏;杨士珍;吴康华 |
分类号 |
C12N15/21(2006.01) |
主分类号 |
C12N15/21(2006.01) |
代理机构 |
上海顺华专利代理有限责任公司 |
代理人 |
陈淑章 |
主权项 |
1.一种重组人复合α干扰素(cIFN)制备方法,其主要步骤是:将Pichia pastorisGS115/pPIC9K-cIFN菌株经种子培养、发酵罐培养、外源蛋白诱导表达及目标蛋白纯化后获得cIFN,其特征在于,在外源蛋白诱导表达启动时加入Tween-20、Tween-80、SDS、TritonX-100、Triton X-114、NP-40、CHAPS、Zwittergent3-14、LiDS、胆酸钠、脱氧胆酸钠、辛烷基葡糖苷(Octylglucoside)或/和Brij35,加入量为0.01~10g/L发酵液;外源蛋白诱导表达的温度控制在20~30℃;外源蛋白诱导表达时发酵液的pH值控制在3.0~7.0且发酵液中的甲醇含量控制在10g/L发酵液以下。 |
地址 |
200237上海市徐汇区梅陇路130号 |