发明名称 一种重组假丝酵母尿酸氧化酶的制备方法
摘要 本发明涉及一种假丝酵母尿酸氧化酶(Urate oxidase,简称UOX)的制备方法。本发明利用原核表达原理与技术,优选了SD序列等相关表达元件,通过PCR方法克隆了假丝酵母(AS2.1495)UOX基因并选用pBV220载体构建了重组质粒,转化大肠杆菌工程菌DH5α或者JM109并经42摄氏度诱导表达,表达量达到菌体总蛋白的50-60%。工程菌经过发酵、破菌后保留上清。上清经过酸沉淀、阳离子交换、阴离子交换方法纯化产品。纯品加入保护剂后制成药用冻干制剂。该制剂用于高尿酸血症的治疗。
申请公布号 CN100371439C 申请公布日期 2008.02.27
申请号 CN03109150.4 申请日期 2003.04.07
申请人 北京双鹭药业股份有限公司 发明人 吴彦卓;徐明波;陈遥;王勇波;卢安京;王俊玲;张蕊;陈起迅;李亚军;崔铁民
分类号 C12N9/02(2006.01);C12N15/31(2006.01);C12N15/53(2006.01);C12N15/63(2006.01);C12N15/70(2006.01);C07K1/18(2006.01);A61K38/44(2006.01);A61P3/00(2006.01);C12R1/72(2006.01) 主分类号 C12N9/02(2006.01)
代理机构 代理人
主权项 1.一种制备假丝酵母尿酸氧化酶的方法,包括下列步骤:①使用上游引物5′CggAATTCATgTCAACAACgCTCTCATCATCCACCTACggCAA3′和下游引物5′CgggATCCTTACAACTTggTCTTCTCC 3′,并以假丝酵母菌AS2.1495基因组DNA为模板扩增尿酸氧化酶基因,②将①获得的假丝酵母菌AS2.1495尿酸氧化酶基因连接到原核表达载体pBV220中,③将②获得的重组原核表达载体转化到大肠杆菌,用氨苄青霉素筛选获得表达菌种,④将③得到的表达菌种常规扩大培养,42摄氏度诱导后,提取菌体上清中的特异产物尿酸氧化酶。
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