一种用细胞工程技术获得的抗紫外线制剂

摘要

本发明涉及一种用细胞工程技术获得的抗紫外线制剂，属于生物技术领域。该抗紫外线制剂经如下乙醇或乙酸乙酯提取工序得到。用乙醇提取抗紫外线制剂时：a.活细胞用90％乙醇研磨，再加入20倍体积的75％乙醇，在50℃温度下密闭提取4小时，然后去除乙醇及水，至最后20min回收溶剂体积不会变化时，即可获得胶状粗提物；b.烘干的细胞在50℃温度下用75％乙醇浸泡1-2小时，其余步骤同鲜活细胞。(2)用乙酸乙酯提取抗紫外线制剂时：a.将活细胞用90％乙醇研磨，再加入20倍体积的乙酸乙酯，在30℃温度下密闭提取4小时，然后去除乙醇及水，即可获得胶状粗提物。b.烘干的细胞在50℃温度下用75％乙醇浸泡1小时，其余步骤同鲜活细胞。本发明具有成本低、抗紫外线佳等优点。

主权项

1.一种用细胞工程技术获得的抗紫外线制剂，其特征在于该抗紫外线制剂经如下步骤得到：(1)高抗紫外线细胞克隆的获得：a.原生质体的获得：挑取柴胡疏松的颗粒状愈伤组织，用镊子捏碎，转入添加了谷氨酰胺100-150mg/l、水解酪蛋白50--200mg/l、2，4-D 0.5--2mg/L、蔗糖3％、pH5.8--6.0的MS液体培养基中震荡培养7天，在无菌条件下，将已分散的悬浮细胞再转入相同配方的液体培养基上振荡培养7天，共3--5次，然后将悬浮细胞用0.4--0.8mol/L甘露醇、2-5m mol/L CaCl2、1％--3％纤维素酶RS和0.3％果胶酶Y-23、pH5.8的等渗混合酶液去壁处理，并50-200rpm/min震荡1-3小时，初步过滤后300--500rpm/min离心2-10分钟，回收原生质体；b.紫外线重复筛选：用0.4--0.8mol/L甘露醇、2-5m mol/L CaCl2、pH5.8的等渗洗液清洗原生质体3-4次，将等渗洗液悬浮原生质体移入3个10cm直径的培养皿中，密度为103--107个/l，放置于超净工作台上，用38-48J/cm2紫外线照射100-130秒；照射完毕后，用添加了谷氨酰胺100-150mg/l、水解酪蛋白400--600mg/l、2，4-D0.5--2mg/L、蔗糖8-10％、对氧氮乙环乙烷吡咯磺酸800-1000mg/L、pH5.6--6.0的原生质体MS培养基置换洗液，然后盖上培养皿盖并用胶带封口，置于黑暗中，在25℃培养15-20天；随后取出形成了小细胞团的原生质体，在添加了谷氨酰胺100-150mg/l、水解酪蛋白50--200mg/l、2，4-D 0.5--2mg/L、蔗糖3％、0.7％的琼脂、pH5.8--6.0的MS固体培养基上培养7天，获得细胞克隆；将获得的细胞克隆繁殖至每个克隆有1g鲜重时，取少量愈伤组织细胞重新去壁，再次用48J/cm2紫外线照射130秒，得到存活原生质体，随后再生细胞壁，恢复分裂，即可获得高抗紫外线细胞克隆；(2)提取抗紫外线制剂，所述抗紫外线制剂由以下a、b、c、d四种步骤的任一步骤获得：a.将(1)中获得的高抗紫外线细胞用90％乙醇研磨，再加入20倍体积的75％乙醇，在50℃温度下密闭提取4小时，再在50℃温度下用旋转蒸发仪去除乙醇及水，至最后20min回收溶剂体积不会变化时，获得的胶状粗提物即为抗紫外线制剂；b.将(1)中获得的高抗紫外线细胞烘干，在50℃温度下，先用75％乙醇浸泡1-2小时，然后研磨，其余步骤同a，获得的胶状粗提物即为抗紫外线制剂；c.将(1)中获得的高抗紫外线细胞用少量90％乙醇研磨，再加入20倍体积的乙酸乙酯，在30℃温度下密闭提取4小时，再在50℃温度下用旋转蒸发仪去除溶剂，至最后20min回收溶剂体积不会变化时，获得的胶状粗提物即为抗紫外线制剂；d.将(1)中获得的高抗紫外线细胞烘干，在50℃温度下，先用75％乙醇浸泡1小时，然后研磨，其余步骤同c，获得的胶状粗提物即为抗紫外线制剂。