从未经发芽的豇豆干种子中直接快速提取DNA的方法

摘要

本发明公开了一种从未经发芽的豇豆干种子中直接快速提取DNA的方法。从豇豆种子中直接提取DNA，所得DNA的质量与用幼苗叶片提取的DNA相比，无论从OD值计算所得的纯度还是从电泳验证的结果来看均没有显著差异，且经检验符合作为PCR扩增模板的条件。本发明简化了从豇豆中提取DNA的步骤，缩短了提取DNA的时间，并且采用了从种子中直接提取DNA的方法，略去了发芽过程，大大节省了时间，在利用DNA指纹图谱进行品种真实性和纯度快速鉴定中具有重要的应用价值。

主权项

1.一种从未经发芽的豇豆干种子中直接快速提取DNA的方法，其特征在于包括如下步骤：1)取1.5mL离心管装入1mL CTAB提取液，于60～65℃水浴下预热；2)将一颗种子置于研钵中，冰浴中充分研磨，将研磨后的粉末转入预热的离心管中，剧烈振荡，置于60～65℃水浴中加热10～30min后于15～20℃，10000转/min离心10～20min；3)取上清液转入另一1.5mL离心管，加入等体积的混合液，混合液中，苯酚、氯仿、异戊醇的体积比为25∶24∶1，反复上下颠倒离心管，充分混匀后于15～20℃，10000转/min离心10～20min，重复一次；4)取上清液，加入2倍体积的无水乙醇，以及1/10体积的3M醋酸钠溶液，轻轻上下颠倒混匀，出现絮状DNA沉淀；5)4℃，5000转/min离心1～2min，去上清液，加入200～500μl无水乙醇，上下颠倒离心管，使DNA沉淀充分被洗涤；6)去掉上清液，室温风干至无酒精味；7)加入50～100μl TE将干燥的DNA沉淀室温溶解。