一种建立小鼠全基因组突变胚胎干细胞库的方法

摘要

本发明提供了一种利用基因捕获技术建立大规模的覆盖小鼠全基因组的突变小鼠胚胎干细胞库的建立方法。它包括步骤：(a)将基因捕获载体导入胚胎干细胞，所述基因捕获载体从5′至3′的结构是：LTR-RNA剪接的受体序列-启动子-筛选基因-RNA剪接的供体序列-LTR，其中筛选基因不含polyA区；(b)筛选存活的、带有筛选基因的胚胎干细胞；和(c)合并存活的胚胎干细胞，获得突变胚胎干细胞库。本发明还提供了突变基因位点的鉴定方法。本发明方法为大规模、高通量获取基因突变小鼠奠定了基础。

主权项

1.一种建立大规模突变胚胎干细胞库的方法，其特征在于，包括步骤：(a)将基因捕获载体导入胚胎干细胞，其中所述的胚胎干细胞是小鼠或大鼠的胚胎干细胞，所述的基因捕获载体从5′至3′的结构是：LTR-RNA剪接的受体序列-启动子-筛选基因-RNA剪接的供体序列-LTR，其中筛选基因不含polyA区；(b)筛选存活的、带有筛选基因的胚胎干细胞；(c)合并存活的胚胎干细胞，获得突变胚胎干细胞库。