水生动物粪样细菌DNA提取试剂盒及方法

摘要

本发提供了一种水生动物粪样细菌DNA提取试剂盒及其方法。在本发明的方法中，首先用乙醇及TritonX-100处理粪样，以增加粪样细菌对裂解液的敏感性。然后采用含SDS的裂解液裂解细胞，此裂解液同时含有对PCR抑制物有吸附作用PVP。此后提供一个含高浓度GuSCN、低pH环境，使溶液中蛋白质进一步变性增强水溶性，而DNA能够绑定在硅胶柱上。最后在低浓度的缓冲液或水中，DNA又从硅胶柱洗脱。采用本试剂盒及其提取方法，可以达到获取水生动物粪样中细菌群落最大量多样性信息、高质量和较高产量DNA的目的。所获得的DNA可以用于分子生态学、系统进化等研究。

主权项

1.一种水生动物粪样中提取细菌DNA试剂盒，其特征在于包括以下试剂：(a)试剂A：为预处理液，含有体积分数60-80％的乙醇和体积分数0.1-1％的TritonX-100；(b)试剂B：为裂解液，含有pH8.0，50-200mM的Tris-Cl、50-200mM的EDTA、50-100mM的NaCl、质量浓度1-2％的PVP、质量浓度0.5-1％的CTAB和质量浓度2-4％的SDS；(c)试剂C：为RNAase，其浓度为5-30mg/ml；(d)试剂D：为DNA联接液，含有4-7.0M的异硫氰酸胍和50-100mM的Tris，调整pH至5-6；(e)试剂E：为DNA洗涤液，由pH7.5，10-20mM的Tris-Cl与无水乙醇按1∶3-4的体积比混合而成；(f)试剂F：为DNA洗脱液，采用ddH2O或pH8.0，5-20mM的Tris-Cl。