新型耐热植酸酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种新型耐热植酸酶制备方法，主要工艺内容包括：将大肠杆菌SUGL用LB培养基进行培养，提取大肠杆菌SUGL的基因；以提取的基因组为模板，用Taq DNA聚合酶进行PCR反应；PCR反应产物用限制性内切酶KpnI和XhoI双酶切，将双酶切目标片段插入经相同限制性内切酶双酶切后的含有以硫氧还原蛋白为融合蛋白的表达载体，再将连接产物转化大肠杆菌BL21(DE3)，从转化后的大肠杆菌中提取质粒pET32－appA；将含有重组表达质粒pET32－appA的BL21(DE3)单菌落接种于LB培养基中培养，在其培养至对数生长期加入诱导剂IPTG诱导培养，制备得到植酸酶。本发明制备的植酸酶保持较高酶活力的酸性pH范围够宽，与畜禽肠道的环境相适应，耐热温度有明显提高。

主权项

1.一种新型耐热植酸酶的制备方法，其特征在于主要包括以下工艺步骤：(1)基因富集：将大肠杆菌SUGL用LB培养基进行培养，提取大肠杆菌SUGL的基因；(2)扩增反应：以大肠杆菌SUGL的基因组为模板，用Taq DNA聚合酶进行PCR反应；(3)酶切连接：PCR产物用限制性内切酶KpnI和XhoI双酶切，将双酶切目标片段插入经相同限制性内切酶双酶切后的含有以硫氧还原蛋白为融合蛋白的表达载体，再将连接产物转化大肠杆菌BL21(DE3)，从转化后的大肠杆菌中提取质粒pET32-appA；(4)接种培养：将含有重组表达质粒pET32-appA的BL21(DE3)单菌落接种于LB培养基中培养，在其培养至对数生长期加入诱导剂IPTG诱导培养，制备得到植酸酶。