诱导稻瘟病菌产生致病性蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种诱导稻瘟病菌产生致病性蛋白的方法，属于植物保护领域。本发明的技术方案是将斜面上保存的稻瘟病菌株接种在普通固体培养基，28℃下扩繁。形成较大的菌落后，转接到50mL的普通液体培养基中，28℃ 150rpm振荡培养3天后，培养液用无菌水冲洗，至菌丝块无色。将冲洗好的菌丝块转接到50mL致病蛋白诱导培养基中，28℃ 150rpm振荡培养48小时。菌液抽滤、冻干后得到稻瘟菌分泌蛋白的提取物，-20℃保存。此方法可以诱导稻瘟病菌大量产生致病性相关蛋白，填补了国内外稻瘟病菌致病机理研究中不能获得致病蛋白的空白，意义重大。

主权项

1.诱导稻瘟病菌产生致病性蛋白的方法，其步骤为：(1)将斜面上保存的稻瘟病菌株接种在普通固体培养基上，28℃下培养；普通固体培养基由以下成分组成：葡萄糖15g/L、酵母粉5g/L、琼脂粉12g/L、H2O 1L；(2)形成较大的菌落后，用接种针挑取3块0.5cm2的菌丝块，转接到50mL的普通液体培养基中，28℃ 150rpm振荡培养；3天后在无菌状态下，用2层纱布过滤，滤出的菌丝块用无菌水冲洗至无色；普通液体培养基主要由以下成分组成：Na3C6H5O7·2H2O 2.5g/L、KH2PO4 5.6g/L、NH4NO3 2.0g/L、MgSO4·7H2O 0.2g/L、CaCl2·H2O 0.1g/L、生物素5.0μg/L、，硫胺10.0mg/L、痕量元素0.1mL、蔗糖15g/L、H2O 1L；(3)将冲洗好的菌丝块转接到50mL致病蛋白诱导培养基中，28℃ 150rpm振荡培养48小时；致病蛋白诱导培养基主要由以下成分组成：Na3C6H5O7·2H2O 2.5g/L、KH2PO4 5.6g/L、MgSO4·7H2O 0.2g/L、CaCl2·H2O 0.1g/L、生物素5.0μg/L、硫胺10.0mg/L、痕量元素0.1mL、蔗糖15g/L、H2O 1L；(4)将培养好的菌液抽滤、冻干后得到稻瘟菌分泌蛋白的提取物，-20℃保存。