一种农杆菌介导的洋葱表皮细胞转化方法

摘要

本发明公开了一种农杆菌介导的洋葱表皮细胞转化方法，该方法将洋葱单层内表皮块浸浮在含有农杆菌的渗透培养基中，使农杆菌与洋葱内表皮块充分接触5～30分钟进行转化后，夹起洋葱表皮块，滤干菌液后平铺于MS固体培养基，于25℃，16小时光照/8小时黑暗的培养条件中，共培养16～24小时。本发明不依赖于基因枪等贵重仪器，不需要金粉等昂贵的实验载体材料，仅需一个超淨工作台以及相关农杆菌菌株就能在最简单地实验环境下实现洋葱表皮细胞的高效转化，全过程4天，低成本，洋葱表皮细胞的转化效率达80％。

主权项

1.一种农杆菌介导的洋葱表皮细胞转化方法，其特征在于包括如下步骤：(1)在无菌环境中，除去洋葱鳞茎外层的3～5层鳞片叶，将洋葱鳞茎消毒后用无菌水洗涤干净，切开洋葱鳞茎，取中层靠近鳞茎内部的鳞茎叶，撕下洋葱单层内表皮块；(2)含有农杆菌的渗透培养基的配制：将含待转化质粒的农杆菌菌株接种至YEB液体培养液中，28℃振荡培养过夜；将培养物离心收集农杆菌菌体，并重悬于预冷至4℃的渗透培养基中，使该含有农杆菌的渗透培养基浓度在OD600＝0.2～1.5；所述渗透培养基为MS+10mM MgCl2+100mMol/L乙酰丁香酮+0.01％2-N吗啡啉乙磺酸；(3)转化：将洋葱单层内表皮块浸浮在上述含有农杆菌的渗透培养基中，使农杆菌与洋葱单层内表皮块充分接触5～30分钟进行转化后，夹起洋葱单层内表皮块，滤干菌液后平铺于MS固体培养基，于25℃，16小时光照/8小时黑暗的培养条件中，共培养16～24小时。