α－L－天冬氨酰－L－苯丙氨酸－β－酯的生产方法和α－L－天冬氨酰－L－苯丙氨酸－α－甲酯的生产方法

摘要

本发明提供一种简便、高产、廉价且不用经历复杂合成路线的α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-β-酯(也称为α-L-(β-o-取代天冬氨酰)-L-苯丙氨酸)生产方法，α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-β-酯是α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-α-甲酯(也称为α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯，产品名：阿斯巴甜)的一种中间体。此外，本发明提供一种简便、廉价且高产的α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-α-甲酯生产方法。使用能够催化以下反应的酶或含酶物质由L-天冬氨酸-α，β-二酯和L-苯丙氨酸生产α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-α-甲酯：在所述反应中，L-苯丙氨酸不对L-天冬氨酸-α，β-二酯的β-酯位点进行亲核攻击，而对其α-酯位点进行亲核攻击。

主权项

1.一种生产α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-β-酯的方法，所述方法包括使用能够通过肽键将L-苯丙氨酸选择性连接至L-天冬氨酸-α，β-二酯的α-酯位点的酶或含酶物质，由L-天冬氨酸-α，β-二酯和L-苯丙氨酸生成α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-β-酯，其中所述酶选自以下(A)至(X)中至少一种：(A) 具有序列表中SEQ ID NO：6所述氨基酸序列的氨基酸残基序数23-616的氨基酸序列的蛋白质，(B) 具有序列表中SEQ ID NO：6所述氨基酸序列的氨基酸残基序数23-616的氨基酸序列，其中有1至30个氨基酸发生替换、缺失和/或增加，并具有通过肽键将L-苯丙氨酸选择性连接至L-天冬氨酸-α，β-二酯的α-酯位点的活性的蛋白质，(C) 具有序列表中SEQ ID NO：12所述氨基酸序列的氨基酸残基序数21-619的氨基酸序列的蛋白质，(D)具有序列表中SEQ ID NO：12所述氨基酸序列的氨基酸残基序数21-619的氨基酸序列，其中有1至30个氨基酸发生替换、缺失和/或增加，并具有通过肽键将L-苯丙氨酸选择性连接至L-天冬氨酸-α，β-二酯的α-酯位点的活性的蛋白质，(E) 具有序列表中SEQ ID NO：18所述氨基酸序列的氨基酸残基序数23-625的氨基酸序列的蛋白质，(F) 具有序列表中SEQ ID NO：18所述氨基酸序列的氨基酸残基序数23-625的氨基酸序列，其中有1至30个氨基酸发生替换、缺失和/或增加，并具有通过肽键将L-苯丙氨酸选择性连接至L-天冬氨酸-α，β-二酯的α-酯位点的活性的蛋白质，(G)具有序列表中SEQ ID NO：23所述氨基酸序列的氨基酸残基序数23-645的氨基酸序列的蛋白质，(H)具有序列表中SEQ ID NO：23所述氨基酸序列的氨基酸残基序数23-645的氨基酸序列，其中有1至30个氨基酸发生替换、缺失和/或增加，并具有通过肽键将L-苯丙氨酸选择性连接至L-天冬氨酸-α，β-二酯的α-酯位点的活性的蛋白质，(I) 具有序列表中SEQ ID NO：25所述氨基酸序列的氨基酸残基序数26-620的氨基酸序列的蛋白质，(J) 具有序列表中SEQ ID NO：25所述氨基酸序列的氨基酸残基序数26-620的氨基酸序列，其中有1至30个氨基酸发生替换、缺失和/或增加，并具有通过肽键将L-苯丙氨酸选择性连接至L-天冬氨酸-α，β-二酯的α-酯位点的活性的蛋白质，(K)具有序列表中SEQ ID NO：27所述氨基酸序列的氨基酸残基序数18-644的氨基酸序列的蛋白质，(L) 具有序列表中SEQ ID NO：27所述氨基酸序列的氨基酸残基序数18-644的氨基酸序列，其中有1至30个氨基酸发生替换、缺失和/或增加，并具有通过肽键将L-苯丙氨酸选择性连接至L-天冬氨酸-α，β-二酯的α-酯位点的活性的蛋白质，(M)具有序列表中SEQ ID NO：6所述氨基酸序列的蛋白质，(N) 具有序列表中SEQ ID NO：6所述氨基酸序列，其中有1至30个氨基酸发生替换、缺失和/或增加，并具有通过肽键将L-苯丙氨酸选择性连接至L-天冬氨酸-α，β-二酯的α-酯位点的活性，含有成熟蛋白区的蛋白质，(O)具有序列表中SEQ ID NO：12所述氨基酸序列的蛋白质，(P) 具有序列表中SEQ ID NO：12所述氨基酸序列，其中有1至30个氨基酸发生替换、缺失和/或增加，并具有通过肽键将L-苯丙氨酸选择性连接至L-天冬氨酸-α，β-二酯的α-酯位点的活性，含有成熟蛋白区的蛋白质，(Q) 具有序列表中SEQ ID NO：18所述氨基酸序列的蛋白质，(R) 具有序列表中SEQ ID NO：18所述氨基酸序列，其中有1至30个氨基酸发生替换、缺失和/或增加，并具有通过肽键将L-苯丙氨酸选择性连接至L-天冬氨酸-α，β-二酯的α-酯位点的活性，含有成熟蛋白区的蛋白质，(S) 具有序列表中SEQ ID NO：23所述氨基酸序列的蛋白质，(T) 具有序列表中SEQ ID NO：23所述氨基酸序列，其中有1至30个氨基酸发生替换、缺失和/或增加，并具有通过肽键将L-苯丙氨酸选择性连接至L-天冬氨酸-α，β-二酯的α-酯位点的活性，含有成熟蛋白区的蛋白质，(U) 具有序列表中SEQ ID NO：25所述氨基酸序列的蛋白质，(V) 具有序列表中SEQ ID NO：25所述氨基酸序列，其中有1至30个氨基酸发生替换、缺失和/或增加，并具有通过肽键将L-苯丙氨酸选择性连接至L-天冬氨酸-α，β-二酯的α-酯位点的活性，含有成熟蛋白区的蛋白质，(W)具有序列表中SEQ ID NO：27所述氨基酸序列的蛋白质，(X)具有序列表中SEQ ID NO：27所述氨基酸序列，并具有通过肽键将L-苯丙氨酸选择性连接至L-天冬氨酸-α，β-二酯的α-酯位点的活性，含有成熟蛋白区的蛋白质。