一种DNA的多点定向突变方法

摘要

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种DNA的多点定向突变方法。本发明利用单向PCR反应，特异扩增突变序列，增加突变模板量；再结合重叠延伸PCR，获得定向多点高频率DNA突变；在这一反应体系中，改变引物设计方法，使之既利于与模板复性，又利于片段间的重叠延伸，从而提高突变频率。本发明为体外定向诱变DNA提供了一种简单有效的方法。

主权项

1、一种DNA分子多点定向突变的方法，包括重叠延伸PCR步骤，其特征在于，在所述的重叠延伸PCR之前增加一个单向PCR步骤：即在期望的基因突变位点处设计一对特异引物，每一条特异引物先进行单向PCR，按照编号为P1与P4，P3与P6，P5与P8，P7与P2的组合将单向PCR产物合并后，进行第一轮PCR，产物为含有不同突变位点的DNA片段；以第一轮PCR产物为模板，进行第二轮PCR；再以第二轮PCR产物为模板，进行第三轮PCR，得到全长基因序列。