赤潮异湾藻半定量检测试纸条及其制备使用方法

摘要

本发明描述了一种基于胶体金免疫层析分析技术(gold immunochromato graphy assay，GICA)的半定量检测赤潮异湾藻试纸条。包括塑料载体板、硝酸纤维素膜和玻璃纤维素膜。检测试纸条硝酸纤维层、玻璃纤维层分别用胶固定在塑料载体板上；检测试纸条硝酸纤维膜上设有赤潮异湾藻抗原分级标记线、质控线；吸水玻璃纤维素膜层置于硝酸纤维膜检测层右端上方；该载体中部设有硝酸纤维膜检测层，在该检测层与加样端吸水层交界处，设有载有胶体金标记的兔抗赤潮异湾藻抗体的玻璃纤维素膜抗体标记层。本发明为常规环境监测、渔业养殖水体检测、以及赤潮生效过程监测的现场实验，提供快速简便的对赤潮多发藻进行半定量的检测方法。

主权项

1、一种赤潮异湾藻半定量检测试纸条，包括塑料载体板，玻璃纤维膜样品层、玻璃纤维膜抗体标记层、硝酸纤维膜检测层、玻璃纤维膜吸水层，其特征在于：所述检测试纸条玻璃纤维膜样品层、玻璃纤维膜抗体标记层、硝酸纤维膜检测层、玻璃纤维膜吸水层顺式胶合固定在塑料载体板一侧；所述检测试纸条硝酸纤维膜检测层上设有赤潮异湾藻抗原分级检测线、二抗质控线；所述赤潮异湾藻抗原分级检测线由检测浓度分别为1010个/m3、108个/m3、106个/m3的三条标记线组成；所述二抗质控线包被有羊抗兔IgG；所述玻璃纤维膜抗体标记层上载有胶体金标记的兔抗赤潮异湾藻抗体；所述赤潮异湾藻半定量检测试纸条玻璃纤维膜抗体标记层上的胶体金标记的兔抗赤潮异湾藻抗体制备方法如下：(1)胶体金的制备：鞣酸—柠檬酸三钠还原法制备20～30nm的胶体金，4℃保存；(2)兔抗赤潮异湾藻抗体的制备：将生长旺盛的赤潮异湾藻细胞培养溶液用终浓度为1～3％的甲醛固定过夜，8000～12000r/min离心10min，收集藻细胞沉淀；藻细胞团块再用蒸馏水清洗一次，PBS清洗二次，每次均通过离心收集藻细胞，离心条件均为，8000～12000r/min，8～12min；将收集的藻细胞分装于1.5ml Eppendorf管，将赤潮异湾藻藻细胞破碎物用灭菌的0.3～0.6ml PBS重悬，混匀，与等体积的弗氏完全佐剂混合乳化，乳化程度尽量完全；初次免疫剂量分别约为1×106、2×106和4×106个细胞每只动物；静脉采血，采集的血液室温放置2小时，然后2000～6000r/min，离心5min，分离血清，4℃冷藏保存；所述玻璃纤维膜吸水层胶合在硝酸纤维膜检测层右端之上；所述塑料载体板中部设有硝酸纤维膜检测层，在该检测层与玻璃纤维膜样品层交界处，设有载有胶体金标记的赤潮异湾藻抗体的玻璃纤维膜抗体标记层，该层一端置于玻璃纤维膜样品层下，并与塑料载体板胶合，另一端设置在硝酸纤维膜检测层之上，并与硝酸纤维膜检测层胶合。