神经干细胞三维立体培养体外扩增的方法

摘要

本发明涉及神经干细胞三维立体培养体外扩增的方法，它包括：选择具有三维立体环境的微载体，对微载体进行预处理，然后用含有40－60ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子、40－60ng/ml表皮细胞生长因子和B27的DMEM/F12神经干细胞无血清培养液包被上述的微载体，再在培养瓶加入1×10⁵－1×10⁶个神经干细胞，将长满神经干细胞的微载体从培养瓶中取出，去除微载体，漂洗细胞，得到神经干细胞，本发明与传统的培养方法相比，多孔微载体有助于扩大培养面积，碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子促进了细胞的增殖分裂，改善细胞生存的微环境，有利于神经干细胞增殖分裂，达到神经干细胞体外扩增的目的。

主权项

1.一种神经干细胞三维立体培养体外扩增的方法，它包括：选择具有三维立体环境的多孔微载体；对微载体进行预处理，其特征在于：它还包括以下步骤：(1)将含有40-60ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、40-60ng/ml表皮细胞生长因子(EGF)和B27的DMEM/F12神经干细胞无血清培养液包被上述的微载体，使促进细胞分裂的碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子均匀地渗透于微载体内；(2)将上述处理好的微载体放入细胞培养瓶内，加入上述神经干细胞无血清培养液，然后在培养瓶加入1×105-1×106个神经干细胞，混合均匀后，再充入含有5％浓度的二氧化碳气体，并在37℃左右的恒温下进行培养，根据细胞的增殖情况，每5-7天更换神经干细胞无血清培养液；(3) 将长满神经干细胞的微载体从培养瓶中取出，放入含有0.05％胰蛋白酶的D-hank’s缓冲液中，在室温下消化10-30分钟，去除微载体，漂洗细胞，得到神经干细胞。