| 主权项 |
1.一种增进产制埃坡霉素之微生物产制埃坡霉素B 之方法,其包含: (a)于培养基中且于藉由疏水性交互作用吸附埃坡 霉素B之树脂的存在下,醱酵产制埃坡霉素之微生 物菌株,其中经培养该微生物达24至48小时时,将丙 酸、丙酸前驱物、或彼等之盐或酯之进料加入至 该培养基中以使相对于在不含该丙酸、丙酸前驱 物、或彼等之盐或酯之进料的情况下经醱酵该微 生物所产制之埃坡霉素B对埃坡霉素A之比例,埃坡 霉素B对埃坡霉素A之比例系增加至少2倍; (b)在以水为底质之基质中收集树脂; (c)利用选出之用于萃取埃坡霉素B并将其自该以水 为底质之基质中分开的溶剂以萃取树脂;及 (d)在色层分析步骤前,结晶来自萃取相之埃坡霉素 B。 2.如申请专利范围第1项之方法,其中该来自步骤(d) 之结晶化的埃坡霉素B实质上为纯埃坡霉素B。 3.如申请专利范围第1项之方法,其中该树脂系经由 一种极性溶剂萃取。 4.如申请专利范围第1项之方法,其中该添加剂为丙 酸钠、丙酸甲酯或丙酸乙酯。 5.如申请专利范围第1项之方法,其中该结晶化步骤 之进行系用来将埃坡霉素A之量减少至约为萃取步 骤(c)后所存在之埃坡霉素A量的55%或更少。 6.如申请专利范围第5项之方法,其更包含步骤(e)至 少一种能有效地将埃坡霉素A的量减少至约为结晶 化步骤(d)后所存在之埃坡霉素A量的55%或更少的第 二次结晶化步骤。 7.如申请专利范围第1项之方法,其中该产制埃坡霉 素之微生物为纤维小体堆囊菌。 8.如申请专利范围第1项之方法,其中该树脂为以苯 乙烯/二乙烯基苯为底质之聚合物。 9.如申请专利范围第8项之方法,其中该树脂为XAD-16 。 10.如申请专利范围第1项之方法,其中该步骤(d)包 含: (i)加入第二种埃坡霉素B无法溶于其中,或仅稍溶 于其中的溶剂; (ii)移除至少一部分萃取溶剂;及 (iii)将所产生之溶剂或溶剂混合物的温度转移成 埃坡霉素B可结晶化之温度。 11.如申请专利范围第10项之方法,其中该萃取溶剂 为醋酸乙酯或MTBE,且该第二种溶剂为甲苯。 12.如申请专利范围第1项之方法,其更包含步骤 (f)在步骤(c)之前,以水溶性乙,或水溶性甲醇,或 含清洁剂及以硷之型式加入的胺试剂的水溶性基 质清洗树脂,该所选出之水溶性基质不会洗提出埃 坡霉素B。 13.如申请专利范围第1项之方法,其中步骤(c)更包 含将含有埃坡霉素B之溶剂磨光过滤。 14.如申请专利范围第1项之方法,其更包含将埃坡 霉素B或其盐转化成具下式之衍生物2,或其盐: 15.如申请专利范围第1项之方法,其更包含将埃坡 霉素B或其盐转化成具下式之衍生物1,或其盐: 16.如申请专利范围第1项之方法,其更包含将埃坡 霉素B或其盐转化成具下式之衍生物3,或其盐: 图式简单说明: 第1图显示epoB-EA型之单斜晶体单位小格的分子 构造。 第2图显示epoB-AN型之单斜晶体单位小格的分子 构造。 第3图显示epoB-IP型之单斜晶体单位小格的分子 构造。 第4图显示epoB-TO型之单斜晶体单位小格的分子 构造。 第5图显示埃坡霉素B之醋酸乙酯溶剂化物(epoB-EA 结晶型)之观察到的(上方)和模拟的(下端)PXRD样式 。 第6图显示埃坡霉素B之甲苯溶剂化物(epoB-TO结晶 型)之观察到的(上方)和模拟的(下端)PXRD样式。 第7图显示埃坡霉素B之乙溶剂化物(epoB-AN结晶 型)之观察到的(上方)和模拟的(下端)PXRD样式。 第8图显示埃坡霉素B之异丙醇溶剂化物(epoB-IP结 晶型)之观察到的(上方)和模拟的(下端)PXRD样式。 第9图显示所观察到之根据实施例7,步骤A制造的埃 坡霉素B之含甲苯的初级溶剂化物之PXRD样式。 第10图显示第9图之含甲苯的初级溶剂化物的热分 析(DSC和TGA)。 第11图显示所观察到之根据实施例7,步骤B制造的 埃坡霉素B之含甲苯的再结晶溶剂化物之PXRD样式 。 第12图显示第11图之含甲苯的再结晶溶剂化物的热 分析(DSC和TGA)。 第13图显示所观察到之根据实施例7,步骤C制造的 埃坡霉素B之含醋酸乙酯的溶剂化物的PXRD样式。 第14图显示第13图之含醋酸乙酯的溶剂化物的热分 析(DSC和TGA)。 |
