同型半胱氨酸诊断试剂盒及同型半胱氨酸浓度测定方法

摘要

本发明涉及一种同型半胱氨酸诊断试剂盒，同时本发明还涉及测定同型半胱氨酸浓度的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学检验测定技术领域。本发明的试剂盒可以是干粉状态，在使用前溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。本发明的试剂盒主要成分包括：缓冲液、S－腺苷基蛋氨酸(S－adenosyl－L－methionine)、同型半胱氨酸甲基转移酶(homocysteine S－methyltransferase EC 2.1.1.10)、氨基酸氧化酶(Amino Acid Oxidase EC 1.4.3.2、EC 1.4.3.3)、谷氨酸脱氢酶(EC1.4.1.2)、α－酮戊二酸酯、还原型辅酶及稳定剂，这些成分可以配成单剂试剂盒、双剂试剂盒或三剂试剂盒；通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生酶促反应，再将反应物置于可见光分析仪下，检测主波长660nm处吸光度上升的大小程度，从而测算出同型半胱氨酸的浓度。采用本发明完全可以通过可见光分析仪器得出所需的测定结果，并且灵敏度高、精确度好，不受内外源物质的污染，便于推广应用。

主权项

1.一种同型半胱氨酸浓度测定方法，其方法原理如下：同型半胱氨酸+腺苷基蛋氨酸 同型半胱氨酸甲基转移酶 腺苷基同型半胱氨酸+蛋氨酸腺苷基同型半胱氨酸+氧+水 氨基酸氧化酶 腺苷基硫代丁酮酸+氨+过氧化氢蛋氨酸+氧+水 氨基酸氧化酶 含氧酸+氨+过氧化氢2氨离子+2α-酮戊二酸酯+2还原型辅酶 谷氨酸脱氢酶 2谷氨酸+2水+2辅酶腺苷基硫代丁酮酸(S-adenosyl-γ-thio-ketobutyrate)含氧酸(oxo-acid)将最终反应物辅酶置于紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度下降的大小程度，测算出同型半胱氨酸浓度大小测定结果。本发明测定同型半胱氨酸浓度的方法，其还原型辅酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一种。