同型半胱氨酸诊断试剂盒及同型半胱氨酸浓度的测定方法

摘要

本发明涉及一种同型半胱氨酸诊断试剂盒，同时本发明还涉及测定同型半胱氨酸浓度的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学检验测定技术领域。本发明的试剂盒主要成分包括：缓冲液、丝氨酸、α－酮戊二酸、胱硫醚β合酶、γ－胱硫醚酶、半胱氨酸脱巯基酶、羟丁酸脱氢酶、谷氨酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、还原型辅酶及稳定剂；通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列的酶(偶)促反应，再将反应物置于紫外/可见光分析仪下，检测主波长340nm处吸光度下降的速度大小，从而测算出同型半胱氨酸的浓度。采用本发明完全可以通过紫外/可见光分析仪器得出所需的测定结果，并且灵敏度高、精确度好，不受内外源物质的污染，便于推广应用。

主权项

1.一种同型半胱氨酸浓度测定方法，其方法原理如下：同型半胱氨酸+丝氨酸 胱硫醚β合酶胱硫醚+水胱硫醚 γ-胱硫醚酶 半胱氨酸+氧代丁酸+氨半胱氨酸+水 半胱氨酸脱巯基酶 硫化氢+氨+丙酮酸氧代丁酸+还原型辅酶 羟丁酸脱氢酶 辅酶+羟基丁酸2氨+2α-酮戊二酸+2还原型辅酶 谷氨酸脱氢酶2谷氨酸2辅酶+2水丙酮酸+还原型辅酶 乳酸脱氢酶乳酸+辅酶羟基丁酸(3-hydroxybutanoate)氧代丁酸(α-Ketobutyrate)将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长340nm吸光度下降的速度，测算出同型半胱氨酸浓度大小测定结果。羟丁酸脱氢酶(EC 1.1.1.30)、谷氨酸脱氢酶(EC 1.4.1.2、EC 1.4.1-3或EC 1.4.1.4)及乳酸脱氢酶(EC 1.1.1.27或EC 1.1.1.28)可以单独使用，也可以一齐使用，一齐合用可以增加测试的灵敏度二到四倍。本发明测定同型半胱氨酸浓度的方法，其还原型辅酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一种。