基因工程重组二连体骨形成蛋白的设计构建方法

摘要

本发明涉及基因工程重组二连体骨形成蛋白的设计构建方法，其特征是用基因工程手段构建“重组人BMP成熟肽二连体”，基本方法是将编码BMP成熟肽的cDNA放在大肠杆菌中表达，使BMP成熟肽在内部正确形成3对双硫健，在BMP成熟肽的链间以肽健相连接而成为BMP二连体以及经在体外纯化复性后折叠成为有活性的BMP；半胱氨酸突变的过程需要加入限制性核酸内切酶位点序列和起始码，并需要PCR的扩增引物；引物根据需要可设计为不同DNA序列；本发明提供了用基因工程的手段使大肠杆菌直接表达类似二聚体结构的有活性的重组二连体骨形成蛋白及其制备方法，以期用廉价的大肠杆菌基因工程系统去大量生产具有良好生物活性的各种BMP。

主权项

1、基因工程重组二连体骨形成蛋白的设计构建方法，其特征在于：用基因工程手段，将2个BMP成熟肽间的双硫键(-S-S-)改为以肽键(-CO-NH-)相连接，即将编码BMP成熟肽段的cDNA放在大肠杆菌中表达，使BMP成熟肽在内部正确形成3对双硫键，在BMP成熟肽的链间以肽键相连接而成为BMP二连体以及经在体外纯化、复性后折叠成为有活性的BMP；所述的体外纯化包括下列步骤：洗济后的包涵体用尿素溶解后，经HiTrap-SP阳离子柱层析，收集含rdhBMP-2m2m的峰液，取样作PAGE-SDS电泳分析；所述的复性包括以下步骤：经纯化的rdhBMP-2m2m蛋白对4-8M尿素透析，再透析去除尿素。