一种检测大豆脂肪氧化酶同功酶的方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测大豆脂肪氧化酶同功酶的方法，包括如下步骤：A、制备大豆Lox1、Lox2和Lox3的单克隆抗体试剂(D－1、D－2、D－3)；B、制备多克隆抗体；C、制备阳性和阴性对照试剂(B－1、B－2)；D、包被酶标板：将步骤B得到的多克隆抗体结合到酶标板上，制备检测时所用酶标板(K)；E、检测：将步骤A和C制备的试剂、步骤D包被的酶标板以及检测过程应用的辅助试剂装在试剂盒内，检测时在酶标板(K)中加上样品后，再加入单克隆抗体试剂(D－1、D－2、D－3)，同时做阳性和阴性对照，利用抗原抗体的结合反应，通过显色检测酶的存在和酶的含量。本发明省时、操作方便；准确可靠、特异性强；样品处理简单，一次可以同时检测出三种脂肪氧化酶，并且一次可以同时检测多个样品，适用于育种单位、仓储单位和加工质检部门，最适用于育种中大量品种(系)的筛选。

主权项

1、一种检测大豆脂肪氧化酶同功酶的方法，其特征在于包括如下步骤：A、制备大豆Lox1、Lox2和Lox3的单克隆抗体试剂(D-1、D-2、D-3)：诱发哺乳动物产生特异抗体，制备特异杂交瘤细胞，通过筛选阳性细胞株，诱导小鼠产生腹水得到大豆Lox1、Lox2和Lox3的单克隆抗体试剂(D-1、D-2、D-3)；B、制备多克隆抗体：利用Sigma公司的Soybean Lox type1-B产品(I)作为免疫抗原诱发哺乳动物产生多克隆抗体血清，得到多克隆抗体；C、制备阳性和阴性对照试剂(B-1、B-2)：以含有3种Lox的普通大豆种子中提取的总蛋白制备阳性对照试剂(B-1)；以脂肪氧化酶全缺失大豆种子中提取的总蛋白制备阴性对照试剂(B-2)；D、包被酶标板：将步骤B得到的多克隆抗体结合到酶标板上，制备检测时所用酶标板(K)；E、检测：将步骤A和C制备的试剂、步骤D包被的酶标板以及检测过程应用的辅助试剂装在试剂盒内，检测时在酶标板(K)中加上样品后，再加入单克隆抗体试剂(D-1、D-2、D-3)，同时做阳性和阴性对照，利用抗原抗体的结合反应，通过显色检测酶的存在和酶的含量。