真鲷胚胎颗粒玻璃化冷冻保存方法

摘要

本发明属海洋生物技术领域，具体讲把真鲷胚胎通过颗粒冷冻、液氮保存及解冻洗脱，获取复活胚胎的过程。本发明对真鲷心跳期胚胎，通过添加抗冻剂，采用快速颗粒玻璃化冷冻、液氮保存、解冻、洗脱等步骤，获得复活胚胎。真鲷胚胎冷冻保存对于真鲷的种质保存、遗传多样性和育种及可持续养殖等方面有着重要意义。

主权项

1、一种真鲷胚胎颗粒玻璃化冷冻保存方法，其特征在于：选择真鲷心跳期至出膜前期胚胎，不同浓度的抗冻剂中两步平衡预冷，用玻璃吸管直接将胚胎滴加在置于液氮面上的铜箔片上，快速冷冻形成玻璃化颗粒，然后直接浸入液氮中冷冻，解冻时直接将冷冻颗粒投入到37℃的0.6M的蔗糖溶液中进行，经洗脱后转入海水中培育，获取复活胚胎；使用抗冻剂时，抗冻剂为甘油，以平衡盐溶液Cortland为基液，两步平衡的甘油浓度分别为第一步20％体积浓度和第二步40％体积浓度；真鲷胚胎在冰箱中预冷时，预冷分两步进行，温度为0～4℃，预冷分别为第一步14～16min、第二步25～35s。