超螺旋质粒分离纯化工艺

摘要

本发明公开了一种超螺旋质粒分离纯化工艺，不使用动物源性的酶，不使用对人畜有毒的苯酚、氯仿等有机溶剂，优化了工艺原料的用量和步骤，降低了生产成本，减少了对环境的污染，提高了提取效率，为超螺旋质粒DNA在制备基因治疗和基因疫苗药物方面的应用打下了坚实的基础。

主权项

1、一种超螺旋质粒分离纯化工艺，其特征是包括以下步骤：(1)取发酵菌液，4℃、5000g离心2min，去上清，得菌体沉淀；(2)STE洗脱液洗涤，于4℃、5000g条件下离心2min，去上清，沉淀干燥得湿菌；(3)湿菌中加入溶液I；(4)加入溶液溶液II，轻轻混匀，室温放置3min；(5)加入冰预冷溶液III，轻轻混匀，冰上放置5min，于4℃、12000g条件下离心15min，取上清液；(6)上清液中加入硫酸铵调电导率至280-285ms/cm，4℃放置20min，于4℃、12000g条件下离心15min，取上清液；(7)上清液经疏水层析柱层析，洗脱收集第2个峰；(8)第2个峰经分子筛柱层析，洗脱收集第1个峰。