由嗜热棒状杆菌衍生之编译胺基酸生物合成途径中之耐热酵素的基因

摘要

依据各种微生物中已知L-胺基酸生合成路径酵素的基因序列编译，在胺基酸层次上的保存区域上设计许多引子组，藉以放大取自热胺基基因棒状杆菌之对等基因(以在较高温度下其功能与麸胺酸棒杆菌相似之酵素较佳)。使用引子及热胺基基因棒状杆菌的染色体DNA作为模版进行PCR。并用可放大片段之引子进行筛选，选择其中内含热胺基基因棒状杆菌染色体DNA质体基因库的目标 DNA片段之选殖菌落。

主权项

1.一种蛋白质,其具有序列表中SEQ ID NO:80之胺基酸 序列或包括1至10个胺基酸残基之取代、删除、插 入、加入或倒置的SEQ ID NO:80之胺基酸序列,该蛋白 质显示在42℃下麸胺酸脱氢之活性系等于或大 于彼在37℃下之活性。 2.一种DNA,其编码蛋白质,该蛋白质具有序列表中SEQ ID NO:80之胺基酸序列或包括1至10个胺基酸残基之 取代、删除、插入、加入或倒置的SEQ ID NO:80之胺 基酸序列,且该蛋白质显示在42℃下麸胺酸脱氢 之活性系等于或大于彼在37℃下之活性。 3.如申请专利范围第2项之DNA,其系下述(a)定义之DNA : (a)一种DNA,其包含序列表中SEQ ID NO:79之核酸序列 。 4.一种产制L-麸胺酸之方法,其包含在培养基中培 养经申请专利范围第2或3项之DNA藉由使用载体所 引入的微生物以于该培养基中产制并累积L-麸胺 酸,及自该培养基收集该L-麸胺酸。 5.如申请专利范围第4项之方法,其中该微生物属于 棒状细菌。 6.如申请专利范围第4项之方法,其中该微生物系麸 胺酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)或热胺基基因棒 状杆菌(Corynebacterium thermoaminogenes)。 图式简单说明: 图1显示取自热胺基基因棒状杆菌AJ12310品系及乳 酸发酵短杆菌2256品系的麸胺酸盐去氢其活性对 温度变化的关系。 图2显示取自AJ12310品系及2256品系之麸胺酸盐去氢 的热稳定性。 图3显示取自AJ12310品系及2256品系之柠檬酸盐合成 之活性对温度变化的关系。 图4显示取自AJ12310品系及2256品系之柠檬酸盐合成 之热稳定性。 图5显示取自AJ12310品系及2256品系之异柠檬酸盐裂 解之活性对温度变化的关系。 图6显示取自AJ12310品系及2256品系之异柠檬酸盐裂 解之热稳定性。 图7显示取自AJ12310品系及2256品系之磷酸果糖磷激 之活性对温度变化的关系。 图8显示取自AJ12310品系及2256品系之磷酸果糖磷激 之热稳定性。 图9显示取自AJ12310品系及2256品系之磷酸烯醇丙酮 酸羧化之活性对温度变化的关系。 图10显示取自AJ12310品系及2256品系之磷酸烯醇丙酮 酸羧化之热稳定性。 图11显示取自AJ12310品系及2256品系之乌头酸之活 性对温度变化的关系。 图12显示取自AJ12310品系及2256品系之乌头酸之热 稳定性。 图13显示取自AJ12310品系及2256品系之异柠檬酸盐去 氢之活性对温度变化的关系。 图14显示取自AJ12310品系及2256品系之异柠檬酸盐去 氢之热稳定性。 图15显示取自AJ12310品系及2256品系之2-酮基戊二酸 盐去氢之热稳定性。 图16显示如何构筑携带sere基因之质体pSCR155。 图17显示如何构筑携带pdhA基因之质体pPDHA-2。 图18显示放大pdhA基因的品系中L-麸胺酸之产量:(a) 37℃以及(b)44℃。 图19显示如何构筑携带icd基因之质体pICD-4。 图20显示放大icd基因的品系中L-麸胺酸之产量:(a)37 ℃以及(b)44℃。 图21显示如何构筑质体pHSG299YGDH及pYGDH。 图22显示如何构筑质体pHSG299YCS及pYCS。