人端粒酶基因转导骨髓间充质干细胞的方法

摘要

本发明提供一种人端粒酶基因转导骨髓间充质干细胞的方法：将pGRN145质粒用Hpa I和Not I限制性内切酶酶切，得到hTERT cDNA片段，并与采用相同限制性内切酶酶切的pLXSN载体相连，构建pLXSN－hTERT重组表达载体；用LipofectAMINE脂质体转导试剂盒通过兼噬性包装细胞系PA317制备pLXSN－hTERT重组表达载体悬浮液后，对人骨髓间充质干细胞进行转导，构建高效表达外源hTERT基因的人骨髓间充质干细胞；用低浓度的潮霉素进行双重筛选人骨髓间充质干细胞。本发明对人骨髓间充质干细胞转导人端粒酶基因，提高细胞中这种蛋白的表达水平，达到提高骨髓间充质干细胞的生命周期的目的。

主权项

1.一种人端粒酶基因转导骨髓间充质干细胞的方法，其特征是通过以下方案实现：(1)构建pLXSN-hTERT重组表达载体，将pGRN145质粒用Hpa I和NotI限制性内切酶酶切，经琼脂凝胶电泳分离提纯得到hTERT cDNA片段，并与采用相同限制性内切酶酶切的pLXSN载体相连，构建成pLXSN-hTERT重组表达载体；(2)构建高效表达外源hTERT基因的人骨髓间充质干细胞，依据LipofectAMINE脂质体转导试剂盒指导说明书，通过兼噬性包装细胞系PA317制备pLXSN-hTERT重组表达载体悬浮液后，在1，5-二甲基-1，5-二氮十一亚甲基聚甲溴化物辅助下对人骨髓间充质干细胞进行8小时的pLXSN-hTERT表达载体转导，构建高效表达外源hTERT基因的人骨髓间充质干细胞；(3)采用低浓度的潮霉素进行双重筛选转导外源hTERT基因的人骨髓间充质干细胞。