固定化脂肪酶催化合成α－亚麻酸单甘油酯的方法

摘要

本发明的固定化脂肪酶催化合成α－亚麻酸单甘油酯的方法属用于一种抗癌药物原料的制备方法领域。步骤有制备固定化酶载体、制备固定化脂肪酶、α－亚麻酸单甘油酯的合成的过程。其中制备固定化酶载体过程包括对介孔材料SBA－15的扩孔和氨基修饰；最后将固定化酶在有机介质中进行α－亚麻酸单甘油酯的合成。本发明方法操作稳定性好、修饰后SBA－15仍呈规则的六方结构，孔道均匀，孔径大，保证了α－亚麻酸单甘油酯合成的需要；脂肪酶最适温度的提高有助于产品产率提高；反应条件温和，酶与产物易分离且酶可回收重复使用，低成本，有利于大规模连续化工业生产：得到的产物颜色浅黄，品质高，疗效确切，热稳定性增强。

主权项

1、一种固定化脂肪酶催化合成α-亚麻酸单甘油酯的方法，有制备固定化酶载体、制备固定化脂肪酶和α-亚麻酸单甘油酯的合成的工艺过程：所说的制备固定化酶载体是，以三嵌段共聚化合物P123为模板剂，用盐酸调节pH值，水为溶剂，正硅酸乙脂为硅源、乙醇为扩孔剂；按摩尔配比为0.8～1.0模板剂/40～60硅源/300～350HCl/7500～10000H2O/300～350扩孔剂；将模板剂溶于水中，加入盐酸搅拌溶解，加入正硅酸乙酯在50℃～60℃搅拌30～45分钟后加入乙醇，搅拌后装入反应釜中，在100℃烘箱中放置48小时；将产物过滤，洗涤，干燥，再经过500℃～550℃灼烧6～8小时，得到介孔材料；按质量体积比为1g介孔材料/20～50ml水将介孔材料分散于水中，加热回流3～4小时，混合物冷却后离心分离，除去水分，白色固体在空气中干燥5～6天；取水合后的介孔材料先后加入甲苯和3-氨丙基三乙氧基硅烷，加热回流4～6小时，其中按质量体积比为1g水合后的介孔材料/100～150ml甲苯/10～20ml 3-氨丙基三乙氧基硅烷；反应结束后，产物过滤，经氯仿洗涤，室温干燥，即得白色产物固定化酶载体；所说的制备固定化脂肪酶是，取固定化酶载体与交联剂戊二醛或鞣酸在搅拌情况下反应2～4小时，之后用磷酸缓冲液洗涤除去未反应的交联剂；再加入20～40ml脂肪酶溶液反应4～6小时；按质量体积比为1g固定化酶载体/20ml～40ml交联剂/20～40ml脂肪酶溶液；最后用磷酸缓冲液洗涤并离心，直到在溶液中检测不到蛋白为止；所说的α-亚麻酸单甘油酯的合成是，将固定化脂肪酶加入到有机溶剂正己烷或乙酸乙酯中，搅拌均匀，再加入等摩尔量的浓度分别为20～30mmol/ml和25.0～30.0mmol/ml的亚麻酸和甘油，按质量体积比为1g固定化脂肪酶/18～22ml亚麻酸；混合液在20～50℃水浴震荡器中孵育5～15分钟；最后，过滤反应混合液，去除固定化酶，然后减压蒸发有机溶剂，残留物为产品α-亚麻酸单甘油酯。