核糖核酸及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了核糖核酸及其制备方法与应用。本发明所提供的核糖核酸的制备方法，是将新鲜胰脏加入水匀浆，匀浆液与饱和苯酚混匀、搅拌，彻底破碎细胞，变性蛋白质，离心分离水相，水溶液加入氯仿抽提，离心分离水相，水相加入乙醇沉淀核糖核酸。本发明采用氯仿－异丙醇为提取溶剂，能有效提取出牛胰腺中的核糖核酸，该提取过程的生产周期短，提取过程可在16～18时间内完成，核糖核酸的提取率为3.0～4.8g/kg胰脏，纯度OD260/OD280＞1.9，较已有的核糖核酸提取工艺大大缩短了提取时间，产量提高1～2倍，由于核糖核酸提取效率的提高，脱氧核糖核酸“污染”含量降低，批成品率提高30％左右，批报废率由30％降低到零，成本降低70％左右；产品经过病毒灭活步骤，安全性更易于保证。

主权项

1、核糖核酸的制备方法，包括如下步骤：1)提取原液的制备将动物胰腺小块绞碎后移入胶体磨，加入提取缓冲液进行研磨，得到提取原液；所述提取缓冲液为0.01～0.10mol/L Tris-乙酸缓冲液，pH4～8；2)核糖核酸的提取提取原液加入0.2～10倍体积饱和酚液体的上层水相，和0.2～10倍体积的饱和酚液体的下层酚相，加热到40～80℃，恒温30～180分钟；然后，在4～10℃下离心，收集上清液；所述饱和酚液体是将苯酚融化后，加入等体积的步骤1)所述提取缓冲液，搅拌均匀后得到的；上清液加入0.5～2倍体积的氯仿-异戊醇溶液，摇匀5～30分钟，在4～10℃下离心，收集上清液；上清液加入0.2～2倍体积氯仿-异戊醇，摇匀后在4～10℃离心，收集含核糖核酸的上层上清液，所述氯仿-异戊醇溶液中氯仿与异戊醇的体积比为10～50∶1；上清液加入0.1～1体积助沉淀缓冲液，再加入2～6倍体积95％乙醇，摇匀，4℃放置过夜，在4～10℃下离心，收集得到核糖核酸沉淀；助沉淀缓冲液为1-5mol/L乙酸钠溶液，pH为3-6。