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Un procedimiento para detectar la cantidad de un polinucleótido diana en una muestra, comprendiendo dicho procedimiento: (a) proporcionar en combinación en un medio (i) una muestra que se sospecha que contiene dicho polinucleótido diana, estando dicho polinucleótido diana en forma de cadena sencilla, (ii) un polinucleótido de referencia que comprende una secuencia que es común con una secuencia de dicho polinucleótido diana, y (iii) una cantidad predeterminada de una sonda oligonucleotídica que tiene una secuencia que se hibrida con dicha secuencia que es común, (b) someter dicha combinación a condiciones para la amplificación de dicho polinucleótido diana y dicho polinucleótido de referencia, en el que dichas condiciones permiten la formación de complejos sustancialmente no disociativos de dicho polinucleótido diana y dicho polinucleótido de referencia, respectivamente, con dicha sonda oligonucleotídica, y en el que dicha cantidad predeterminada de dicha sonda oligonucleotídica es inferiora la cantidad esperada de dicho polinucleótido diana amplificado, (c) determinar la razón de la cantidad de dicho complejo de dicho polinucleótido diana con dicha sonda oligonucleotídica con respecto a la cantidad de dicho complejo de dicho polinucleótido de referencia con dicha sonda oligonucleotídica, y (d) relacionar dicha razón con dicha cantidad conocida de dicho polinucleótido de referencia para determinar la cantidad de dicho polinucleótido diana en dicha muestra.
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