利用APES修饰玻片制备蛋白质、DNA及脂类微阵列的方法

摘要

本发明公开了一种利用APES(3-氨丙基三乙氧基硅烷)修饰玻片制备蛋白质、DNA及脂类微阵列的方法，由下述方法组成：(1)将玻片分别用强碱和浓硫酸浸洗，双蒸水冲洗至玻片洁净，离心机甩干；(2)将上述洗净的玻片放入体积比为1∶45～55的丙酮稀释的APES中，停留20～50秒钟；(3)取出玻片，稍停片刻，再入纯丙酮溶液涮去未结合的APES；(4)以上述APES修饰的玻片作为基片，固定蛋白质、DNA及脂类，制备微阵列。利用本发明的方法与其它化学处理的玻片相比，固定效果好，检测灵敏度高，平均荧光值高，激光共聚焦检测信噪比高，具有广泛的临床应用价值，将带来巨大的社会效益和经济效益。

主权项

1.一种利用APES修饰玻片制备蛋白质、DNA及脂类微阵列的方法，由(1)将玻片分别用强碱和浓硫酸浸洗，双蒸水冲洗至玻片洁净，离心机甩干；(2)将上述洗净的玻片放入体积比为1∶45～55的丙酮稀释的APES中，停留20～50秒钟；(3)取出玻片，稍停片刻，再入纯丙酮溶液涮去未结合的APES；(4)以上述APES修饰的玻片作为基片，固定蛋白质、DNA及脂类，制备用于检测各种自身抗体的抗原微阵列组成，其特征是，所述固定蛋白质制备抗原-抗体微阵列的方法是，将人IgG用PEST做系列稀释，形成10个浓度梯度；用点样仪分别成列点在上述用APES修饰的玻片上，每一浓度点1行5个重复；阳性对照选用同样点样液稀释的IgG，阴性对照选用PBST点样液，同样分别成列点在前述用APES修饰的玻片上；形成除阳性对照和阴性对照外的5×10阵列；所述固定DNA制备抗原-抗体微阵列的方法是，将从原核表达载体pcDNAII中提取的DNA，用PBST做系列稀释，形成6个浓度梯度；用点样仪分别成列点在上述用APES修饰的玻片上，每一浓度点1行5个重复；阳性对照选用同样点样液稀释的IgG，阴性对照选用PBST点样液，同样分别成列点在前述用APES修饰的玻片上；形成除阳性对照和阴性对照外的5×6阵列；所述固定脂类制备抗原-抗体微阵列的方法是，将心磷脂用二甲基亚砜做系列稀释，形成6个浓度梯度；用点样仪分别成列点在上述用APES修饰的玻片上，每一浓度点1行5个重复；阳性对照选用人IgG，阴性对照选用DMSO点样液，同样分别成列点在前述用APES修饰的玻片上；形成除阳性对照和阴性对照外的5×6阵列。