沙眼衣原体、淋病奈瑟菌双重实时荧光PCR检测方法

摘要

本发明涉及沙眼衣原体、淋病奈瑟菌双重实时荧光PCR检测方法以及试剂盒组成。本发明分别针对沙眼衣原体的Bour cryptic plasmid ORF1基因、淋病奈瑟菌的胞嘧啶转甲基酶基因设计两对引物、两条不同荧光染料标记的探针，采用实时荧光PCR方法扩增目的基因。本发明采用两种互不干扰的波长检测荧光，波长1检测探针FCT标记的荧光染料强度，Ct值为0或大于27：沙眼衣原体阴性，Ct值小于26：阳性，病人沙眼衣原体感染；波长2检测探针FNG标记的荧光染料强度，Ct值为0或大于27：淋病奈瑟菌阴性，Ct值小于26：阳性，病人淋病奈瑟菌感染。如果沙眼衣原体、淋病奈瑟菌检测同时为阳性，则病人合并感染沙眼衣原体、淋病奈瑟菌。

主权项

1、一种沙眼衣原体、淋病奈瑟菌双重实时荧光PCR检测方法以及试剂盒组成。本发明分别针对沙眼衣原体的Bour cryptic plasmid ORF1基因、淋病奈瑟菌的胞嘧啶转甲基酶基因设计两对引物、两条不同荧光染料标记的探针，采用实时荧光PCR方法扩增目的基因。本发明采用两种互不干扰的波长检测荧光，波长1检测探针FCT标记的荧光染料强度，Ct值0或大于27：沙眼衣原体阴性，Ct值小于26：阳性，病人沙眼衣原体感染；波长2检测探针FNG标记的荧光染料强度，Ct值0或大于27：淋病奈瑟菌阴性，Ct值小于26：阳性，病人淋病奈瑟菌感染。如果沙眼衣原体、淋病奈瑟菌检测同时为阳性，则病人合并感染沙眼衣原体、淋病奈瑟菌。本发明具有特异性好，灵敏度高，定量精确，快速简便，可重复性高，可对沙眼衣原体、淋病奈瑟菌进行快速定性定量检测，并可替代一直沿用的传统的培养法和ELISA(酶联免疫吸附试验)诊断方法。此外，沙眼衣原体、淋病奈瑟菌双重实时荧光PCR检测方法降低了临床样品PCR诊断的工作量和诊断的成本。按照权利要求1所述的沙眼衣原体、淋病奈瑟菌双重实时荧光PCR检测方法，其特征在于：所述双重实时荧光PCR扩增基因序列的反应体系为：双重实时荧光PCR扩增反应体系：5xPCR缓冲液(mix) 10μlPCT(80pmol/μl) 1μlPNG(80pmol/μl) 1μlFCT(60pmol/μl) 1μlFNG(60pmol/μl) 1μlTaq酶(2U/μl) 2μlUNG酶(0.1U/μl) 2μl模板 5μlddH2O 27μl总反应体积：50μl