分离神经胶质干细胞的方法

摘要

本发明公开了一种分离神经胶质干细胞的方法，属于人类或物细胞的培养，或基因工程技术。本发明首先进行原代细胞培养，将乳鼠大脑皮层，经细胞滤网过滤，收集细胞，孵育，分离的细胞在增殖培养基中培养；然后将原代培养细胞种植、培养2－3星期至出现OP细胞，分离，孵育，传代20次获得为mOPpri细胞，传代50次获得mOP细胞。经这样的设计，本发明已经开发出一种新的少支胶质干细胞模型及分离方法，大大方便了少突胶质细胞成熟、分化和功能的体内体外研究。本发明采用多阶段细胞培养的分选步骤，获得高纯度OP细胞，适用于各种基因敲除型小鼠，其表型稳定，解决了在体内、外少支胶质干(op)细胞分化为成熟的少支胶质细胞问题。

主权项

1.一种分离神经胶质干细胞的方法，其特征在于a.原代细胞培养：乳鼠大脑皮层，移入含有HBSS的培养皿内，经吸液管吹打，细胞滤网过滤，4℃，2000rpm离心2min，收集细胞，加入0.05％胰酶-EDTA，37℃孵育；分离的细胞以每孔5×104的密度种在未包被的六孔板内增殖培养基中培养；b.mOP细胞的分离和传代：收集原代培养18天后的原代培养细胞，低密度重新种植到未包被培养皿，培养2-3星期，直到出现OP细胞群，分离；置于37℃，5％二氧化碳培养箱中孵育，传代20次获得为mOPpri细胞，传代50次获得mOP细胞。