用于检测转铁蛋白的免疫电极的制备方法

摘要

本发明公开了一种用于转铁蛋白检测的免疫电极的制备方法，包括金电极的预处理、2-胺基苯硫醇低聚物层的形成、金电极与戊二醛偶合、金电极的免疫试剂共价固定等步骤。该方法制备的免疫电极对含铁转铁蛋白的检测灵敏度可达0.04ng/ml低限。

主权项

1、一种用于检测转铁蛋白的免疫电极的制备方法，其特征是：所述的制备方法按如下具体步骤进行：(1)金电极的预处理：将金电极用＜0.05μm的三氧化二铝粉末抛光，然后在二次水和乙醇中超声清洗15min，最后用0.5M硫酸在-0.4～1.2V范围内反复扫描，直到获得重复性的伏安信号；(2)2-胺基苯硫醇低聚物层的形成：将0.5M的2-胺基苯硫醇溶液用99.99％N2除氧5min，将干净的金电极放在10mL0.5M的上述2-胺基苯硫醇溶液中浸泡24h，浸泡温度为26～32℃，然后将金电极表面用乙醇和二次水清洗，再将金电极浸入pH7.4的磷酸盐缓冲液溶液中，在-0.8～0.6V之间循环扫描25次进行聚合；(3)金电极与戊二醛偶合：将含有15％(w/w)戊二醛溶液，用5％盐酸调至pH1.84，再用99.99％N2除氧5min.后得偶合溶液，将经步骤(2)处理后的金电极插入上述偶合溶液中24h，反应温度为26～32℃，进行低聚物修饰，再用二次水清洗；(4)金电极的免疫试剂共价固定：在4℃下，将2-胺基苯硫醇与戊二醛的偶合层修饰的金电极浸泡于含有89ng/mL转铁蛋白抗血清的、pH为7.4的磷酸盐缓冲液溶液中12h，然后将嵌入抗体的金电极浸泡于5％(v/v)乙胺溶液中，至完全阻断电极表面未反应的羰基为止，再用二次水冲洗，制得免疫电极。