| 主权项 |
1、肌荚蛋白抗体制备方法，其特征在于其步骤为：1)克隆myopodin基因N端1077bp的片断：根据myopodinN端的此1077bp个碱基序列，设计一对引物，通过PCR扩增此片断，所述的一对引物为：上游引物AAAAGGATCCTTTAAGAAGCGAGACGTCGG，酶切位点BamHI，下游引物AAAGAATTCACTTTTGTTTGG，酶切位点EcoRI；2)构建重组质粒：把通过PCR扩增的目的片断插入到质粒pGEX-4T-2，然后转化到大肠杆菌中，在加入相应抗性的平板上筛选含有重组质粒的单菌落，然后从筛选出的菌体中提取重组质粒；3)在BL21中表达目的蛋白：把提取的重组质粒转化到大肠杆菌BL21中，培养转化了重组质粒的BL21到OD值0.6～1.0，加入IPTG至0.2-0.8mM，诱导；4)经谷胱甘肽-Sepharose-4B层析法纯化得到有生物活性的蛋白：把诱导后的菌体离心收集后，用PBS重悬，加溶菌酶溶菌，再超声波破碎，然后把破碎后的菌液离心，收集上清，然后把上清于谷胱甘肽-Sepharose-4B的珠子混合，孵育过夜，第二天，离心收集珠子，然后用谷胱甘肽洗脱下来目的蛋白；5)用此纯化后的蛋白做抗原去免疫兔子，用不完全福氏佐剂加强，取血，得到抗血清，获得myopodin抗体。 |
