| 主权项 |
1.一种活体外监控生物系统中至少一种标的物质 之方法,包括: a)提供含有该至少一种标的物质之该生物系统; b)以至少一种脱辅基(apo)金属结合蛋白质标记该至 少一种标的物质; c)提供容许该至少一种脱辅基金属结合蛋白质发 出信号之条件; d)观察或测定该信号; e)根据观察或测定之信号监控该至少一种标的物 质; 其中该至少一种脱辅基金属结合蛋白质为蓝铜结 合蛋白质。 2.如申请专利范围第1项之方法,其中该监控步骤包 括测定该至少一种标的物质在该生物系统中的位 置。 3.如申请专利范围第1项之方法,其中该监控步骤包 括将该生物系统中之该至少一种标的物质定量。 4.如申请专利范围第1项之方法,其中该生物系统系 选自病毒、细菌、植物或动物。 5.如申请专利范围第1项之方法,其中该至少一种标 的物质系选自细胞或组织。 6.如申请专利范围第5项之方法,其中该细胞系选自 细菌、真菌、植物或动物细胞。 7.如申请专利范围第5项之方法,其中该细胞系藉由 以编码该至少一种蓝铜结合蛋白质之DNA分子转染 该细胞而被标记。 8.如申请专利范围第5项之方法,其中该细胞系藉由 连接该至少一种蓝铜结合蛋白质至该细胞而被标 记。 9.如申请专利范围第5项之方法,其中该至少一种蓝 铜结合蛋白质系于活体内提供至该细胞。 10.如申请专利范围第5项之方法,其中该至少一种 蓝铜结合蛋白质系于活体外提供至该细胞。 11.一种测定感兴趣药物的细胞毒性之方法,包括: a)暴露至少一种细胞于该感兴趣药物; b)使用申请专利范围第5项之方法监控该至少一种 细胞; c)藉由测定该至少一种细胞是否受该感兴趣药物 之影响而决定该感兴趣药物之细胞毒性。 12.如申请专利范围第5项之方法,其中该至少一种 蓝铜结合蛋白质系连接于该组织。 13.如申请专利范围第12项之方法,其中该至少一种 标的物质为蛋白质。 14.如申请专利范围第7项之方法,其中该蛋白质系 藉由以该蛋白质与至少一种蓝铜结合蛋白质制得 融合蛋白质而被标记。 15.如申请专利范围第1项之方法,其中容许该至少 一种蓝铜结合蛋白质发出信号之该条件包括,提供 结合于该至少一种蓝铜结合蛋白质之至少一种金 属。 16.如申请专利范围第15项之方法,其中该蓝铜结合 蛋白质选自阿祖林(azurin)、假阿祖林(pseudo-azurin) 、质体蓝素(plastocyanin)、及植物蓝素(phytocyanin)。 17.如申请专利范围第15项之方法,其中该蓝铜结合 蛋白质为选自抗坏血酸盐氧化、血浆铜蓝蛋白( ceruloplasmin)、及漆(laccase)之蓝氧化。 18.如申请专利范围第15项之方法,其中该蓝铜结合 蛋白质为亚硝酸还原。 19.如申请专利范围第1项之方法,其中该至少一种 蓝铜结合蛋白质系选自红血球素、过氧化氢及 铁传递蛋白(transferrin)。 20.一种用于检测表现感兴趣蛋白质的至少一种细 胞之方法,包括 a)将具有编码该感兴趣蛋白质的DNA序列之DNA分子, 及具有编码至少一种蓝铜结合蛋白质的DNA序列之 附加DNA分子导入该至少一种细胞中; b)提供容许表现该至少一种蓝铜结合蛋白质及该 感兴趣蛋白质之条件; c)提供容许该至少一种蓝铜结合蛋白质发出信号 之条件; d)藉由观察或测定该至少一种蓝铜结合蛋白质的 信号来检测表现该感兴趣蛋白质之细胞。 21.如申请专利范围第20项之方法,其中该DNA分子与 该附加DNA分子相连接。 22.如申请专利范围第20项之方法,其中该细胞系选 自细菌、真菌、植物或动物细胞。 23.一种定位细胞中至少一种感兴趣蛋白质之方法, 包括 a)将DNA分子导入该细胞中;该DNA分子包含 b)编码该至少一种感兴趣蛋白质的DNA序列,该DNA序 列系连接于编码至少一种蓝铜结合蛋白质之附加 DNA序列,使得由该DNA分子产生的蛋白质具有融合于 至少一种蓝铜结合蛋白质之至少一种感兴趣蛋白 质; c)提供容许该融合蛋白质表现之条件; d)提供容许该至少一种蓝铜结合蛋白质发出信号 之条件; e)由该信号测定该融合蛋白质的位置,因而将该细 胞中之该感兴趣蛋白质定位。 24.一种筛选用于治疗病毒或细菌感染的治疗剂之 方法,包括: a)以至少一种蓝铜结合蛋白质标记该病毒或细菌; b)提供容许该至少一种蓝铜结合蛋白质发出信号 之条件; c)观察或测定该信号; d)藉由监控自该病毒或细菌观察或测定得之该信 号而决定该治疗剂对于治疗该病毒或细菌病毒是 否有效。 25.如申请专利范围第24项之方法,其中该病毒为HIV 病毒。 图式简单说明: 第1图描述利用PCR扩增得自细菌DNA之阿祖基因所用 之引子:5'引子BCP-1C或BCP-2C,及3'引子BCP-1NC。 第2图为pLNCX-BCP1载体之图谱:5'MoMuLV LTR:145-733;+( 延伸之包装信号):803-1612;新霉素(Neomycin)抗性基因( Neor):1656-2450;紧邻CMV启动子前端(Pcmv):2800-3617;BCP1- 基因:3622-4701;3'MoMuLV LTR:4128-4720;胺青霉素抗性基 因(-内醯胺,Ampr):6023-6865。 pLNCX-BCP1于2000年8月3日寄存在位于Gent大学分子生 物实验室之比利时微生物保存协调中心,寄存编号 为LMBP4156。此外,含质体pLNCX-BCP1之大肠菌XL1-blue菌 株也于2000年9月14日寄存在中国台湾食品工业发展研究 所(FIRDI),寄存编号为CCRC 940314。 第3图描述细胞溶解液之西方墨点法之结果,墨点 证实阿祖林(azurin)之表现。 |
