通过体胚发生途径建立草地早熟禾高效再生体系的方法

摘要

本发明涉及以草地早熟禾成熟种子为材料建立其再生体系的方法，主要步骤包括：将无菌种子播于无菌芽床诱导萌发后再诱导产生愈伤组织，经继代培养、胚性愈伤组织诱导培养及植株再生诱导培养获得高频再生植株。培养过程中除植株再生是在含噻重氮苯基脲TDZ的1/2MS培养基上进行的外，其它培养阶段均在含2，4-二氯苯氧乙酸2，4-D和噻重氮苯基脲TDZ(或激动素KT)不同浓度配比的MSM培养基培养。间接诱导愈伤组织可明显提高愈伤组织的诱导率；继代培养过程添加Cu²⁺，利于改善愈伤组织的生长质量，提高胚性愈伤组织的诱导率，低浓度TDZ、培养基大量元素及蔗糖用量利于提高愈伤组织植物再生能力。

主权项

1.一种建立草地早熟禾再生体系的方法，其特征在于所述的方法具体步骤包括：(1)将草地早熟禾成熟种子用稀释后的洗涤剂洗涤，用流动的自来水充分冲洗后，移入无菌环境，用70～75％乙醇和0.1％升汞组合灭菌，再用无菌水冲洗3～5次后，接种于无菌芽床进行萌芽诱导，待种子开始萌芽或萌动时，将其转入无菌环境，对芽体切割后接种到诱导培养基中，黑暗条件下诱导愈伤组织，诱导培养基为添加2.0～4.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸2，4-D和0.05mg/L噻重氮苯基脲TDZ的MSM培养基；(2)诱导得到的愈伤组织接种于添加2.0～3.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸2，4-D，0.02～0.3mg/L噻重氮苯基脲TDZ以及0.5～0.9mg/LCuSO4的MSM培养基，进行两次继代培养，继代周期20天，获得胚性愈伤组织；(3)选择胚性愈伤组织接种于添加0.1～1mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸2，4-D，0.05～0.2mg/L噻重氮苯基脲TDZ的MSM培养基，弱光培养，光照强度为200～400勒克斯；(4)诱导得到的体细胞胚接种于仅添加噻重氮苯基脲TDZ0.05～0.3mg/L的1/2MS培养基，蔗糖用量为15g/L，见光培养，光照强度为2000～3000勒克斯，整个培养过程，培养温度为20℃～30℃，每培养20天换一次新鲜培养基。