一种微球菌两级复凝固定化方法

摘要

本发明涉及向Na·Alg溶液里加入1ml吐温80和微球菌，在40-45℃，通过9#针头注射器，控制下滴速度40-60滴/分钟，向Gel和CaCl₂混合液中滴加，稳定3.5-5h，然后在CaCl₂溶液中二次钙化10-15min，随后在CS溶液中进行二级复凝聚反应2-3h，再利用柠檬酸囊内液化5-8min，以无菌生理盐水水浸泡6-24h，增殖培养制得微胶囊。本发明优点为：微球菌生理活性良好，微胶囊囊壁的机械强度高、壁结构均匀，微胶囊的缓释性能优异。

主权项

1.一种微球菌两级复凝固定化方法，按如下步骤操作，其特征在于：1)壁材配制：按质量百分比配制1.5-2.5％海藻酸钠的水溶液，灭菌冷却，加入与海藻酸钠的水溶液体积比为200∶1的无菌吐温80，并加入海藻酸钠的水溶液总质量15-30％的微球菌液体种子，搅拌均匀；2)一级芯材溶液配制：按质量百分比配制含1.5-2.5％明胶和1.0-2.0％氯化钙的水溶液，pH＝5.0-7.0，灭菌冷却，备用；3)二次钙化溶液配制：按质量百分比配制0.2-0.8％氯化钙的水溶液，灭菌冷却，备用；4)二级芯材溶液配制：按质量百分比配制0.1-0.7％壳聚糖的水溶液，pH＝3.5-5.5，灭菌冷却，备用；5)囊内液化液配制：按摩尔浓度配制0.050-0.060mol/L柠檬酸水溶液，灭菌冷却，备用；6)微胶囊制备：在40-45℃下，将壁材溶液在无菌条件下按40-60滴/分钟的速度滴入一级芯材溶液中，不断搅拌；胶珠成型后，稳定3.5-5h，将胶珠转移到二次钙化液中，二次钙化10-15min，然后将胶珠转移到二级芯材溶液中，进行二级复凝聚反应2-3h；将胶珠转移到柠檬酸溶液中，搅拌囊内液化5-8min；取出胶珠用无菌水或无菌生理盐水浸泡6-24h，置于增殖培养基中，增殖培养后制得微胶囊。