循环杂交延伸DNA测序方法

摘要

循环杂交延伸DNA测序方法是一种实现了延伸标记物的清除方法，涉及一种循环杂交－延伸DNA测序方法，其步骤为：步骤1)当测序引物与固定的未知DNA模板杂交后，通过在测序引物上每次延伸一个标记单体、并检测后来确定不同位置的未知DNA模板在该次延伸中的碱基信息；步骤2)将延伸标记单体的测序引物从DNA模板中变性分离，并重新将测序引物与DNA模板杂交，用未标记的单体的延伸至已经确定的碱基序列，然后改用标记的单体延伸继续测序，该方法实现了延伸标记物的清除方法，每次杂交测序引物只延伸测定一小段的序列，错误延伸的效应不严重，重新杂交后的延伸按照流行的分子生物学方法进行，能够始终维持DNA模板和测序引物的量重新杂交后的延伸按照流行的分子生物学方法进行，没有标记物量的累积效应，能够始终维持DNA模板和测序引物的量。

主权项

1、一种循环杂交-延伸DNA测序方法，其特征在于DNA序列确定是通过“杂交-延伸测序”步骤来实现的：步骤1)当测序引物与固定的未知DNA模板杂交后，通过在测序引物上每次延伸一个标记单体、并检测后来确定不同位置的未知DNA模板在该次延伸中的碱基信息，当测序引物随着标记单体的不断延伸而导致标记物的量的变化不能反应延伸的实际情况时，停止该次杂交的延伸测序，此时未知的DNA模板中的一小段几个碱基序列已经确定；步骤2)将延伸标记单体的测序引物从DNA模板中变性分离，并重新将测序引物与DNA模板杂交，用未标记的单体的延伸至已经确定的碱基序列，然后改用标记的单体，完全按照步骤1)的方法，在已经确定的碱基序列上，继续延伸并测定下一小段碱基的序列；循环上述“杂交-延伸”过程，直到未知DNA模板的序列确定。