基于单链抗体的脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测方法及其试剂盒

摘要

本发明提供一种基于单链抗体的脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测方法及其试剂盒，该检测方法是用所分离的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单链抗体检测相应的毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇：采用竞争酶联免疫吸附分析来检测样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量；该试剂盒由以下部件构成：酶标板；标样；包被抗体；单链抗体；酶标抗原；清洗液；底物溶液；终止液。本发明克服了现有单克隆抗体生产费时费力费钱的不足，提供一种新的基因工程单链抗体快速检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇，该单链抗体可在细菌中大规模生产，生产更容易、简便和经济，减少诊断试剂费用；基于该检测方法的试剂盒，具有检测快速、灵敏度高、方便快捷；制造工艺简单、成本低等诸多优点。

主权项

1.一种基于单链抗体的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的快速检测法，其特征在于：用所分离的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单链抗体检测相应的毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇：采用竞争酶联免疫吸附分析来检测样品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，其具体检测步骤为：1)包被：将抗由13个氨基酸组成的标鉴的抗体，即抗E-tag的抗体稀释于包被缓冲液中，使其终浓度为15μg/mL，用多通道移液器加入到聚苯乙烯酶标板的微孔中，加入量为100μL/孔，在温度条件为4℃的冰箱中包被过夜；2)洗涤：将包被好的酶标板微孔中的液体全部弃去，并用磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，洗涤方法是先将每个微孔中加入300μL洗涤液，放置3min后，将微孔中的洗涤液全部倒出，再加入相同体积新的洗涤液，重复所述的洗涤操作，共3次；3)封闭：向每个微孔中加入300μL封闭液，在37℃的培养箱中封闭1h；4)洗涤：将酶标板微孔中的液体全部弃去，并用磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，所述洗涤方法是先将每个微孔中加入300μL洗涤液，放置3min后，将微孔中的洗涤液全部倒出，再加入相同体积新的洗涤液，重复所述的洗涤操作，共3次；5)加入抗体：将提取的融合有13个氨基酸组成的标签的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单链抗体加入到封闭过的酶标板微孔中，加入量为100μL/孔，温度条件为37℃下温育1～2h；第一孔作为空白对照，不加抗体，再依次各孔加入不同稀释度的抗体；6)洗涤：将酶标板微孔中的液体全部弃去，并用磷酸盐缓冲溶液洗涤3次，所述洗涤方法是先将每个微孔中加入300μL洗涤液，放置3min后，将微孔中的洗涤液全部倒出，再加入相同体积新的洗涤液，重复所述的洗涤操作，共3次；7)加待检样品和酶标抗原：将脱氧雪腐镰刀菌烯醇-辣根过氧化物酶交联产物和待检样品混匀，将混合液加入微孔中，加入量100μL/孔，在37℃的培养箱中温育1h；8)洗涤：将酶标板微孔中的液体全部弃去，并用洗涤液洗涤3次，所述洗涤方法是先将每个微孔中加入300μL洗涤液，放置3min后，将微孔中的洗涤液全部倒出，再加入相同体积新的洗涤液，重复所述的洗涤操作，共3次；9)显色：向酶标板的微孔中加入底物溶液，100μL/孔，37℃温育10min后用终止液终止反应；10)记录：用酶标仪读取λ＝650nm处的吸光度值OD650，并根据吸光度值OD650计算所要检测毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量。