一种分离纯化汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原的方法

摘要

本发明涉及一种分离纯化汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原的方法，其集成了细胞破碎、层析和膜分离等技术，具体包括：将常规工艺发酵培养得到的汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原培养液破碎至细胞破碎率达到50～90％；离心除去细胞碎片，调节pH值和电导率后进行阴离子交换层析，收集活性回收率大于20％以上的洗脱液；合并洗脱液，再次分别调节电导率和pH值后进行疏水层析；采用超滤膜将样品浓缩；最后使用凝胶过滤柱进行凝胶过滤，得到纯度大于99％以上的汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原。该方法纯化活性回收率高，且纯度可达到99％以上，操作步骤少，操作周期短，成本相对较低，易于放大到工业化规模生产，具有较大的实际应用价值。

主权项

1、一种分离纯化汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原的方法，其包括如下的步骤：1)细胞破碎取常规工艺发酵培养得到的汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原培养液，通过离心并洗涤用于表达乙肝表面抗原的汉逊酵母细胞，然后置于高压匀浆机或球磨机中，加入占待破碎液重量比0.05～0.3％的Triton X-100及终浓度为0.1～10mM的酶抑制剂，反复破碎1～6次，直至细胞破碎率达到50～90％；2)离子交换层析将破碎后细胞以5000～20000g的转速离心除去细胞碎片，用1.0M NaOH和1.0MHCl调节pH值至5.5～8.5，且电导率小于5.0～20mS/cm，然后进行阴离子交换层析，收集含汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原活性回收率大于20％以上的紫外吸收峰的洗脱液；3)疏水层析合并阴离子交换层析得到的活性汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原组分，加入无机盐直至其电导率为50～200ms/cm，然后用1.0M NaOH和1.0M HCl调节pH至5.5～8.5，然后进行疏水层析，收集含汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原活性回收率大于20％以上的紫外吸收峰的洗脱液；4)超滤浓缩对疏水层析所得组分，采用截留分子量为100～500KD的超滤膜将样品一次或多次重复浓缩，直至样品中蛋白质浓度为0.1～1.0mg/ml，超滤时流速为20～100cm/s，压力在0.3Mpa以下；5)凝胶过滤将步骤4)得到的浓缩液使用凝胶过滤柱进行凝胶过滤，最后得到纯度大于99％以上的汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原；上述方法各步骤均在2～30℃温度范围内进行。