发明名称 部位专一性之同位素标示蛋白质,胺基酸及用于其之生化先驱物
摘要 本发明揭示部位专一性之同位素标示缬胺酸、白胺酸、异白胺酸及此等胺基酸之生物合成先驱物。胺基酸以13C或14C标示离羧基最远之甲基碳原子。本发明亦揭示这些标示胺基酸、2-酮基-4-(nC)丁酸及2-酮基-3-(nC-甲基)-4-(nC)-丁酸之生化先驱物,其中每一个n皆为13或14。本发明亦揭示含有此等部位专一性同位素标示胺基酸之蛋白、蛋白片段、多及制备生化先驱物、胺基酸、蛋白、蛋白片段与多之方法。
申请公布号 TWI283659 申请公布日期 2007.07.11
申请号 TW089105713 申请日期 2000.03.28
申请人 亚培公司 发明人 史帝芬W. 菲斯克;大卫J. 欧革里
分类号 C07C229/08(2006.01);C07K1/13(2006.01);C12P21/00(2006.01) 主分类号 C07C229/08(2006.01)
代理机构 代理人 陈长文 台北市松山区敦化北路201号7楼
主权项 1.一种式Ia化合物 或其盐,其中R3系氢或nCH3,且每一个n皆为13或14。 2.根据申请专利范围第1项之化合物,其选自下列基 团所组成之群: 2-酮基-4-(13C)-丁酸; 2-酮基-3-(13C-甲基)-4-(13C)-丁酸; 2-酮基-4-(14C)-丁酸;及 2-酮基-3-(14C-甲基)-4-(14C)-丁酸; 或其盐。 3.一种制备式Ia化合物之方法 或其盐,其中R3系选自氢或nCH3之基团;且每一个n皆 为13或14,其包括 a)使式IV化合物 与同位素标示碘甲烷(H3nCI)反应以制备式V化合物 及 b)移除第三丁酯及二甲基基以制备2-酮基-4-(nC)- 丁酸。 4.根据申请专利范围第3项之方法,其进一步包括盐 化步骤b)之反应产物。 5.根据申请专利范围第3项之方法,其进一步包括: c)此步骤b)产物与同位素标示之碘甲烷(H3nCI)反应( 其中n系13或14)以制备式VI化合物 及 d)移除第三丁酯及二甲基基以制备2-酮基-3-(nC- 甲基)-4-(nC)-丁酸。 6.根据申请专利范围第5项之方法,其进一步包括盐 化步骤d)之反应产物。 7.一种制备蛋白、蛋白片段或多之方法,其含有 至少一种胺醯基,该胺醯基选自由4-(nC-甲基)-5-(nC)- 白胺酸、5-(nC)-异白胺酸及3-(nC-甲基)-4-(nC)-缬胺酸 所组成之群组,其包括: a)遗传修饰一合适微生物以表现该蛋白、蛋白片 段或多; b)将该遗传修饰微生物培养于养分培养基中,其含 有式Ia化合物 或其盐,其中每一个n皆为13或14,且R3系氢或nCH3;及 c)分离该蛋白、蛋白片段或多。 8.一种制备含有至少一个3-甲基-5-(nC)-异白胺酸基 胺醯基蛋白、蛋白片段或多之方法,其包括: a)遗传修饰一合适微生物以表现该蛋白、蛋白片 段或多; b)将该遗传修饰微生物培养于养分培养基中,其含 有化合物5 或其盐,其中每一个n皆为13或14;及 c)分离该蛋白、蛋白片段或多。 9.一种制备2-胺基-3-(nC-甲基)-4-(nC)-丁酸之方法,其 包括: a)遗传修饰一合适微生物以表现缬胺酸之同元聚 合物; b)将该遗传修饰微生物培养于养分培养基中,其含 有化合物6 或其盐,其中每一个n皆为13或14; c)分离缬胺酸之同元聚合物,其系藉该遗传修饰微 生物进行表现;及 d)使该同元聚合物片段化以制备2-胺基-3-(nC-甲基)- 4-(nC)-丁酸。 10.一种制备2-胺基-4-(nC-甲基)-5-(nC)-戊酸之方法,其 包括: a)遗传修饰一合适微生物以表现白胺酸之同元聚 合物; b)将该遗传修饰微生物培养于养分培养基中,其含 有 化合物6 或其盐,其中每一个n皆为13或14; c)分离白胺酸之同元聚合物,其系藉该遗传修饰微 生物进行表现;及 d)使该同元聚合物片段化以制备2-胺基-4-(nC-甲基)- 5-(nC)-戊酸。 11.一种制备2-胺基-3-甲基-5-(nC)-戊酸之方法,其包 括: a)遗传修饰一合适微生物以表现异白胺酸之同元 聚合物; b)将遗传修饰微生物培养于养分培养基中,其含有 化合物5 或其盐,其中每一个n皆为13或14; c)分离异白胺酸之同元聚合物,其系藉该遗传修饰 微生物进行表现;及 d)使该同元聚合物片段化以制备2-胺基-3-甲基-5-(nC )-戊酸。
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