毛细管电泳电化学发光检测美托洛尔和阿替洛尔的方法

摘要

本发明涉及毛细管电泳电化学发光检测美托洛尔和阿替洛尔的方法，属于分析检测技术领域。采用毛细管电泳电化学发光检测联用装置，对美托洛尔和阿替洛尔的标准品溶液及其加标的尿样进行了直接进样分析。该方法的灵敏度高，操作简单。对美托洛尔和阿替洛尔标准品溶液检测的线性范围分别为5×10^－8－1.0×10^－5mol/L和7.5×10^－8－1.0×10^－6mol/L，检测下限分别为5.0×10^－9mol/L和7.5×10^－8mol/L。鉴于β－阻断剂类药物结构的相似性，该方法可适用于更多β－阻断剂类药物的分析检测，在β－阻断剂类药物的临床监测和控制方面有重大意义。

主权项

1.毛细管电泳电化学发光检测美托洛尔和阿替洛尔的方法，其检测步骤和条件如下：所用仪器装置为：内径25μm未涂层融硅毛细管；直径500μm Pt盘工作电极，Ag/AgCl参比电极(饱和KCl溶液)，Pt丝辅助电极；MPI-A型毛细管电泳电化学发光检测仪；所用试剂为：Ru(bpy)3Cl2·6H2O，NaH2PO4，Na2HPO4，H3PO4，NaOH，美托洛尔和阿替洛尔标准品；所用试剂均为分析纯；所有溶液均用二次水配制，配制好的溶液在使用之前均经0.22μm滤膜过滤；1)、对毛细管及工作电极做以下处理：(1)、毛细管在第一次使用前，用0.1mol/L NaOH溶液冲洗过夜；在操作过程中，每天用0.1mol/L NaOH溶液冲洗过夜，再分别用二次水和缓冲液冲洗毛细管柱2-10min，最后在分离条件下平衡2-10min；(2)、直径500μm Pt盘工作电极在操作前在1.0mol/L H2SO4溶液中，在-0.2-1.5V(vs.Ag/AgCl)电位范围内循环扫，直到得到Pt电极的特征循环伏安曲线，操作过程中将工作电极在检测池缓冲溶液中循环扫描10-20周，扫描电位范围为0-1.35V，以清除电极表面污染物，活化工作电极；2)、缓冲溶液的配制(1)、pH＜5.0的缓冲溶液的配制方法是：先配制浓度为10-50mmol/L的NaH2PO4溶液和浓度为1.0mol/L的H3PO4溶液，然后用1.0mol/L的H3PO4溶液调节至pH＜5.0；(2)、5.0≤pH≤9.0的缓冲溶液的配制方法是：先分别配制浓度为10-100mmol/L的NaH2PO4和Na2HPO4溶液，将同浓度的二者混合，即可得到5.0≤pH≤9.0的缓冲溶液；(3)、pH＞9.0的缓冲溶液的配制方法是：先配制浓度为10-100mmol/L的Na2HPO4和浓度为1.0mol/L的NaOH溶液，然后用1.0mol/L的NaOH溶液调节至pH＞9.0；3)、美托洛尔和阿替洛尔标准品溶液的配制及其静态实验美托洛尔和阿替洛尔储备液的浓度均为为1.0mmol/L，储备液在4℃冰箱中避光保存；美托洛尔和阿替洛尔标准品溶液的静态实验：以100mmol/L，pH 7.5的NaH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液作为背景电解质，扫描电位范围为0-1.35V，记录稳定时的循环伏安(CV)曲线和电化学发光(ECL)曲线；然后在含0.4mmol/L美托洛尔和阿替洛尔的背景电解质中循环扫描，扫描区间同样为0-1.35V，记录稳定时的CV曲线和ECL曲线；将美托洛尔和阿替洛尔的CV曲线和ECL曲线与背景电解质的对比，以确定美托洛尔和阿替洛尔是否具有增强Ru(bpy)3 2+电化学发光活性；4)、CE-ECL检测美托洛尔和阿替洛尔标准品溶液的检测条件，并在此条件下进行线性范围和检测限的考察选择恒电位操作方式，在1.0-1.3V之间变化检测电位；2-10s，10-15kV之间变化进样时间及进样高压；10-20kV之间变化分离高压；10.0-50.0mmol/L之间变化NaH2PO4-Na2HPO4电泳缓冲溶液浓度，5.0-10.0之间变化NaH2PO4-Na2HPO4电泳缓冲溶液pH值； 检测池中NaH2PO4-Na2HPO4电泳缓冲溶液固定为100mmol/L，pH值在5.0-10.0之间变化；检测池中Ru(bpy)3 2+的浓度在1.0-10.0mmol/L范围内变化；光电倍增管高压为600-900V；在获得的上述的检测条件下，在5×10-9-1.0×10-5mol/L浓度范围内考察美托洛尔的检测线性范围；在7.5×10-8-1.0×10-5mol/L浓度范围内考察阿替洛尔的检测线性范围，同时也考察了二者的检测下限；5)、美托洛尔和阿替洛尔标准品溶液分离条件的考察进样时间在1-10s之间变化，10.0-50.0mmol/L之间变化NaH2PO4-Na2HPO4电泳缓冲溶液浓度，2.0-5.0之间变化NaH2PO4-Na2HPO4电泳缓冲溶液pH值；6)、空白尿样及含美托洛尔和阿替洛尔标准品的加标尿样的制备过程取健康人的尿液，经0.22μm滤膜过滤，之后用二次水稀释10-20倍，作为空白尿样；将等体积的美托洛尔和阿替洛尔储备液加入空白尿样中配成含美托洛尔和阿替洛尔标准品浓度均为1.0×10-7-1.0×10-5mol/L的加标尿样；7)、空白尿样及含美托洛尔和阿替洛尔标准品的加标尿样的检测在5)中所得的最佳分离检测条件下，获得空白尿样及含美托洛尔和阿替洛尔标准品的加标尿样的电泳图谱。