利用幼胚离体挽救培养获得百合远缘杂种的方法

摘要

本发明公开了一种利用幼胚拯救获得百合属远缘杂种的方法，它选择云南野生百合及国内外各类优异亲本，以东方百合杂种系为母本，进行杂交，通过杂交授粉子房及幼胚的离体培养可在胚败育之前将其取出培养，避免远缘杂种胚早衰，使大量远缘杂交胚继续发育成正常种子，尽快进入选育程序，缩短了育种周期，同时获得了大量的远缘杂交后代，实现了百合属种间远缘杂交，创造了一批新种质，胚挽救技术与百合瓶内结球技术的结合，有效缩短了百合杂交后代的培育周期和杂种成活率。

主权项

1、一种利用幼胚离体挽救培养获得百合远缘杂种的方法，其特征在于经过以下步骤：A、将授粉后8-23天的受精子房切割下来，在2～6℃温度条件下存放8～15小时，用浓度为75％的酒精对其表面擦拭2-3次，再用浓度为75％的酒精浸泡消毒1～2分钟，然后在浓度为0.05～0.1％的升汞溶液中浸泡12～18分钟，用无菌水洗2～3次，选取膨大的部位，将子房横切为0.2cm的切片；B、在无菌条件下，将灭菌后的子房切片接种到单位为mg/L的下列诱导培养基中：MS基本培养液萘乙酸(NAA) 0.5～1.0mg/L蔗糖 60000mg/L琼脂 6000mg/LpH 5.0～5.5在光照8～10h/d，光强800～1200Lx，培养室温度22～26℃条件下，培养20～30d后，在解剖镜下剥离膨大的胚珠；C、在与步骤B相同的培养条件下，对剥离的胚珠进行单胚培养，培养40～50天后幼胚萌发；D、将萌发的幼胚接种到单位为mg/L的下列增殖培养基中：MS基本培养液6-苄基氨基嘌呤(6-BA) 0.5～1.0mg/L萘乙酸(NAA) 0～0.1mg/L蔗糖 30000mg/L琼脂 6000mg/LpH 5.5～5.8在光照10～12h/d，光强1000～1500Lx，培养室温度22～26℃条件下继代培养，每15～20d继代一次；E、继代3次后，待每个单胚增殖到15～25株后，将其分离成单株，切除叶片后接种到单位为mg/L的下列培养基中：MS基本培养液萘乙酸(NAA) 0～0.1mg/L蔗糖 60000～90000mg/L琼脂 6000mg/LpH 5.5～5.8在无光照，培养室温度为22～26℃条件下，培养80～100d出瓶，包装后于2～4℃条件下放置60～90天，即可下地种植。