识别对虾白斑综合症病毒单链抗体A1的胶体金标记方法

摘要

本发明公开了一种识别对虾白斑综合症病毒单链抗体的胶体金标记方法，涉及分子生物学技术应用于水产养殖业，该方法将对虾白斑综合症病毒单链抗体经纯化、透析、调配pH值、确定胶体金溶液与单链抗体混和的最佳稳定量、把胶体金溶液与单链抗体混和、离心、去上清液，即得到胶体金标记的单链抗体A1。该方法可简化检测对虾白斑综合症病毒的操作步骤，使得检测时间和成本大大降低。胶体金标记的单链抗体可用于对虾白斑综合症病毒的检测，用于胶体金免疫电镜法，可研究单链抗体A1的抗原决定簇在病毒结构上的定位，以及示踪病毒的感染过程。

主权项

1、一种识别对虾白斑综合症病毒单链抗体A1的胶体金标记方法，其特征在于，该方法按下列步骤顺序进行：a、取识别对虾白斑综合症病毒单链抗体A1，用亲和层析法纯化单链抗体A1，并在0.005mol/L NaCl pH7.0的溶液中透析；b、用柠檬酸钠还原法制备20-30nm的胶体金溶液，用凝胶电泳法测定单链抗体A1的等电点是pH5.8，将胶体金溶液的pH调至6.2，使胶体金溶液的pH略高于单链抗体A1的等电点；c、用1毫升胶体金溶液与0.1毫升含0.1-0.5毫克不同蛋白浓度的单链抗体A1混和，5分钟后，加入0.1毫升10％的NaCl溶液，放置1-2小时，观察溶液的颜色变化，将呈红色的溶液中最低的蛋白浓度确定为抗体的最佳稳定量；d、按步骤c确定的最佳稳定量，将单链抗体A1用5分钟时间均匀加入到胶体金溶液中，室温搅拌30分钟；e、用12000转/分离心60分钟，去上清液，沉淀物即为胶体金标记的单链抗体A1。