CCR5自体多肽疫苗及其制备方法

摘要

本发明公开了一种CCR5自体疫苗及其构建方法，根据CCR5的结构应用氨基酸序列为GGGGS的linker将CCR5胞外段四个片段连接起来，模拟CCR5胞外段结构，将其称为rCCR5，同时在rCCR5的N端插入T细胞辅助表位PADRE，应用人工合成的方法获得了PADRE－rCCR5的基因，目的基因克隆入pBV－220原核表达载体，转化大肠杆菌，在大肠杆菌中高效表达，经包涵体洗涤，凝胶柱层析，透析复性获得了纯化的目的蛋白，以经纯化后得到目的蛋白PADRE－rCCR5作为CCR5自体多肽疫苗抗原免疫动物显示，PADRE－rCCR5能诱导机体产生高滴度的CCR5特异性的抗体，应用流式细胞术检测免疫抗血清对表达CCR5细胞株U937结果显示，平均结合率达到75.8％。表明免疫抗血清对表达CCR5受体的细胞具有一定的结合能力，为构建新型的CCR5自体疫苗和艾滋病疫苗研究奠定了一定的基础。

主权项

1.一种CCR5自体多肽疫苗，其特征在于，制得的该疫苗含有模拟CCR5胞外段结构的rCCR5氨基酸片段和一个为增强疫苗免疫原性的T细胞辅助表位PADRE，所述的CCR5自体多肽疫苗即PADRE-rCCR5的氨基酸序列如下：Met Ala Lys Phe Val Ala Ala Try Thr Leu Lys Ala Ala Ala Gly Ser Asp Tyr Gln Val Ser Ser Pro Ile Tyr AspIle Asn Tyr Tyr Thr Ser Glu Pro Cys Gln Lys Ile Asn Val Lys Gln Ile Ala Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser TyrAla Ala Ala Gln Trp Asp Phe Gly Asn Thr Met Cys Gln Gly Gly Gly Gly Ser Arg Ser Gln Lys Glu Gly LeuHis Tyr Thr Cys Ser Ser His Phe Pro Tyr Ser Gln Tyr Gln Phe Trp Lys Asn Phe Gln Thr Leu Lys Gly GlyGly Gly Ser Asn Thr Phe Gln Glu Phe Phe Gly Leu Asn Asn Cys Ser Ser Ser Asn Arg Leu Asp Gln Ala MetT细胞辅助表位PADRE的氨基酸序列如下：AlaLysPheValAlaAlaTryThrLeuLysAlaAlaAla。