一种快速特异扩增差异表达基因长片段的方法

摘要

一种快速特异扩增差异表达基因长片段的方法，涉及一种表达基因的克隆。提供一种重复性高、假阳性低、快速实惠和获得的基因片段较长的快速特异扩增差异表达基因长片段的方法。步骤为：以总RNA或mRNA为模板，dT－RSL为引物，在逆转录酶的作用下合成第一条cDNA链；PCR扩增：第一条cDNA链经稀释后，与dT－RSL引物和RSL随机引物混合于PCR管中退火，进行一个PCR循环反应，合成第二条cDNA链，随后将PCR反应体系中的dT－RSL和RSL随机引物分别与cDNA第二条链特异结合，经PCR循环，扩增出特异的DNA片段；取扩增产物溶解于上样缓冲液中，用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增的产物。

主权项

1.一种快速特异扩增差异表达基因长片段的方法，其特征在于其步骤为：1)逆转录合成cDNA第一条链：以总RNA或mRNA为模板，dT-RSL为引物，在逆转录酶的作用下合成第一条cDNA链；2)PCR扩增：第一条cDNA链经稀释后，与dT-RSL引物和RSL随机引物混合于PCR管中退火，进行一个PCR循环反应，合成第二条cDNA链，随后将PCR反应体系中的dT-RSL和RSL随机引物分别与cDNA第二条链特异结合，经PCR循环，扩增出特异的DNA片段；3)结果检测：取扩增产物溶解于上样缓冲液中，用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增的产物；4)采用普通方法割胶纯化差异表达基因片段，与T质粒载体连接，转入感受态细胞，对基因片段的序列进行测定和分析。